A megfelelő térfogat kiválasztása a minták mérésére
A spektrofotométer ideális annak meghatározására, hogy egy anyag mennyit nyel el vagy enged át egy bizonyos hullámhosszú fényt, ami koncentráció- és tisztasági információt eredményez. Egy normál kutatólaboratóriumban a spektrofotométer tartalmaz egy szabványos méretű kamrát, amelybe egy küvetta van behelyezve, amely lehetővé teszi, hogy egy bizonyos hullámhosszú fény egy meghatározott távolságot, úgynevezett úthosszt haladjon át a mintán. Amikor kiválasztja a megfelelő küvettát a mintákhoz és alkalmazásokhoz, vegye figyelembe a minta típusát, a térfogati igényeket, a koncentrációszinteket és a végrehajtandó méréseket.
A küvetta kiválasztásakor három lehetőséget kell figyelembe venni:
- A makroküvettához 3,5-35 ml-es mérőkapacitás szükséges.
- A hagyományos küvetta mérőkapacitása 3,5 ml.
- A mikrotérfogat-adapterhez olyan mintákra van szükség, amelyek egy mikroliteres tartományban vannak, általában 2 ul és 3,5 ml között.
Macro Cuvettes
New cuvettes and cells with updated stocks with volume >3.5mL.
Standard Cuvettes
New cuvettes with updated stocks 3.5mL.
Micro Cuvettes
New cuvettes with updated stocks <3.5mL.
Az is elengedhetetlen, hogy a kiválasztott küvetta átlátszó legyen a minták teszteléséhez használt hullámhosszokon. Bár az üveg és a polisztirol általában átlátszó a látható fény számára, elnyelik az UV fényt. Az üveg és a polisztirol ezért alkalmasak kolorimetriás fehérjevizsgálatokra vagy a baktériumtenyészet sűrűségének kimutatására, de nem alkalmasak a nukleinsavak koncentrációjának és tisztaságának kimutatására a 230, 260 és 280 nm-es UV-tartományban. A kvarc és más UV-kompatibilis polimerek viszont általában átlátszóak látható és ultraibolya fényben is, így ideálisak UV-fényminták mérésére.
Mind a küvettának, mind a mikrotérfogat-adapternek vannak előnyei és hátrányai. Íme néhány ötlet, amelyek segítenek kiválasztani a megfelelő edényt a minták pontos és következetes méréséhez.
Küvetták
A műszertől függően a spektrofotométerek három optikai sugárzási fénymagasság (a küvetta aljától mért távolság, más néven Z dimenzió vagy fénymagasság) valamelyikén végeznek méréseket: 8,5, 15 vagy 20 mm. A legtöbb spektrofotométer elfogadja a makroküvettákat, mivel egyenes falúak. Másrészt a mikroküvetták külső alapterülete megegyezik a szabványos küvettákéval, de a belsejük általában kúpos, hogy korlátozza a szükséges mintaanyag mennyiségét. A standard küvetta ezzel szemben arra szolgál, hogy a mintán keresztül mérjen a kamrában egy bizonyos fénymagasságnál. Nagyon fontos, hogy kétszer ellenőrizze, hogy a minta mérésére használt küvetta Z mérete kompatibilis-e a műszer fénymagasságával. Vegye figyelembe a küvetták következő főbb jellemzőit:
- Ha alacsony koncentrációjú anyagokat, például RNS-t, egyszálú DNS-t és oligonukleotidokat mér, elég hosszú úthosszra lesz szüksége ahhoz, hogy az értékeket a műszer lineáris mérési tartományán belül tartsa. Bár a piacon jelenleg kapható küvetták egy része alternatív útvonalhosszt is lehetővé tesz, a szabványos méret 10 mm. Egyes kettős úthosszúságú küvetták 90 fokkal elfordíthatók egy másik úthosszon történő leolvasáshoz.
- Javasoljuk, hogy steril, eldobható műanyag küvettát használjon, ha a mérés után ki szeretné venni a mintát. Bár ömlesztett küvetták is rendelkezésre állnak, egyes alkalmazásokhoz egyedileg csomagolt, steril küvettákra lehet szükség, amelyek fehérje- vagy nukleázmentesek.
- A minta 600 nm-es hullámhosszú abszorbanciáját, amelyet általában “OD600-nak” neveznek, a baktériumtenyészet koncentrációjának becslésére használják. A makroküvetta nagyobb mintakapacitása lehetővé teszi az ehhez hasonló heterogén minták pontosabb leolvasását.
Egy szabványos spektrofotométerben többféle küvetta, valamint egy mikrotérfogat-adapter is elfér. A minta típusa, a felhasznált térfogat, a küvetta anyagának úthossza és átlátszósága egyaránt befolyásolja a felhasznált küvetta térfogatát, így a tudósok szabadon végezhetik kísérleteiket következetesen és helyesen. Tehát nézze át a megbeszélt lehetőségeket, válassza ki a hullámhosszt és az úthosszt, és kezdje el a mérést!
Recent Comments