A megfelelő térfogat kiválasztása a minták mérésére
A spektrofotométer ideális annak meghatározására, hogy egy anyag mennyit nyel el vagy enged át egy bizonyos hullámhosszú fényt, ami koncentráció- és tisztasági információt eredményez. Egy normál kutatólaboratóriumban a spektrofotométer tartalmaz egy szabványos méretű kamrát, amelybe egy küvetta van behelyezve, amely lehetővé teszi, hogy egy bizonyos hullámhosszú fény egy meghatározott távolságot, úgynevezett úthosszt haladjon át a mintán. Amikor kiválasztja a megfelelő küvettát a mintákhoz és alkalmazásokhoz, vegye figyelembe a minta típusát, a térfogati igényeket, a koncentrációszinteket és a végrehajtandó méréseket.
A küvetta kiválasztásakor három lehetőséget kell figyelembe venni:
- A makroküvettához 3,5-35 ml-es mérőkapacitás szükséges.
- A hagyományos küvetta mérőkapacitása 3,5 ml.
- A mikrotérfogat-adapterhez olyan mintákra van szükség, amelyek egy mikroliteres tartományban vannak, általában 2 ul és 3,5 ml között.
Macro Cuvettes
Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm
(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VFOF10) 0,8 ml-es, rövid magasságú küvetta, 10×12,5×12,5 mm, 4 ablak, olvadó, fényút 10 mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
Az is elengedhetetlen, hogy a kiválasztott küvetta átlátszó legyen a minták teszteléséhez használt hullámhosszokon. Bár az üveg és a polisztirol általában átlátszó a látható fény számára, elnyelik az UV fényt. Az üveg és a polisztirol ezért alkalmasak kolorimetriás fehérjevizsgálatokra vagy a baktériumtenyészet sűrűségének kimutatására, de nem alkalmasak a nukleinsavak koncentrációjának és tisztaságának kimutatására a 230, 260 és 280 nm-es UV-tartományban. A kvarc és más UV-kompatibilis polimerek viszont általában átlátszóak látható és ultraibolya fényben is, így ideálisak UV-fényminták mérésére.
Mind a küvettának, mind a mikrotérfogat-adapternek vannak előnyei és hátrányai. Íme néhány ötlet, amelyek segítenek kiválasztani a megfelelő edényt a minták pontos és következetes méréséhez.
Küvetták
A műszertől függően a spektrofotométerek három optikai sugárzási fénymagasság (a küvetta aljától mért távolság, más néven Z dimenzió vagy fénymagasság) valamelyikén végeznek méréseket: 8,5, 15 vagy 20 mm. A legtöbb spektrofotométer elfogadja a makroküvettákat, mivel egyenes falúak. Másrészt a mikroküvetták külső alapterülete megegyezik a szabványos küvettákéval, de a belsejük általában kúpos, hogy korlátozza a szükséges mintaanyag mennyiségét. A standard küvetta ezzel szemben arra szolgál, hogy a mintán keresztül mérjen a kamrában egy bizonyos fénymagasságnál. Nagyon fontos, hogy kétszer ellenőrizze, hogy a minta mérésére használt küvetta Z mérete kompatibilis-e a műszer fénymagasságával. Vegye figyelembe a küvetták következő főbb jellemzőit:
- Ha alacsony koncentrációjú anyagokat, például RNS-t, egyszálú DNS-t és oligonukleotidokat mér, elég hosszú úthosszra lesz szüksége ahhoz, hogy az értékeket a műszer lineáris mérési tartományán belül tartsa. Bár a piacon jelenleg kapható küvetták egy része alternatív útvonalhosszt is lehetővé tesz, a szabványos méret 10 mm. Egyes kettős úthosszúságú küvetták 90 fokkal elfordíthatók egy másik úthosszon történő leolvasáshoz.
- Javasoljuk, hogy steril, eldobható műanyag küvettát használjon, ha a mérés után ki szeretné venni a mintát. Bár ömlesztett küvetták is rendelkezésre állnak, egyes alkalmazásokhoz egyedileg csomagolt, steril küvettákra lehet szükség, amelyek fehérje- vagy nukleázmentesek.
- A minta 600 nm-es hullámhosszú abszorbanciáját, amelyet általában “OD600-nak” neveznek, a baktériumtenyészet koncentrációjának becslésére használják. A makroküvetta nagyobb mintakapacitása lehetővé teszi az ehhez hasonló heterogén minták pontosabb leolvasását.
Egy szabványos spektrofotométerben többféle küvetta, valamint egy mikrotérfogat-adapter is elfér. A minta típusa, a felhasznált térfogat, a küvetta anyagának úthossza és átlátszósága egyaránt befolyásolja a felhasznált küvetta térfogatát, így a tudósok szabadon végezhetik kísérleteiket következetesen és helyesen. Tehát nézze át a megbeszélt lehetőségeket, válassza ki a hullámhosszt és az úthosszt, és kezdje el a mérést!
Recent Comments