Het geschikte volume kiezen om uw monsters te meten
Een spectrofotometer is ideaal om te bepalen hoeveel een materiaal een bepaalde golflengte van licht absorbeert of doorlaat, wat resulteert in informatie over concentratie en zuiverheid. In een normaal onderzoekslaboratorium bevat een spectrofotometer een kamer van standaardformaat waarin een cuvet wordt geplaatst, waardoor een bepaalde golflengte van het licht een bepaalde afstand door het monster kan afleggen, ook wel de padlengte genoemd. Houd bij het kiezen van de juiste cuvet voor uw monsters en toepassingen rekening met het monstertype, de volumebehoeften, de concentratieniveaus en de uit te voeren metingen.
Bij het kiezen van een cuvet zijn er drie keuzes om te overwegen:
- Een macrokuvet heeft een meetcapaciteit van 3,5 tot 35 ml nodig.
- Een conventionele cuvet heeft een meetcapaciteit van 3,5 ml.
- Voor een microvolume-adapter zijn monsters nodig die in het bereik van één microliter liggen, meestal tussen 2ul en 3,5ml.
Macro Cuvettes
New cuvettes and cells with updated stocks with volume >3.5mL.
Standard Cuvettes
New cuvettes with updated stocks 3.5mL.
Micro Cuvettes
New cuvettes with updated stocks <3.5mL.
Het is ook essentieel om ervoor te zorgen dat de cuvet die u kiest transparant is voor de golflengten die u gaat gebruiken om uw monsters te testen. Hoewel glas en polystyreen over het algemeen transparant zijn voor zichtbaar licht, absorberen ze UV-licht. Glas en polystyreen zijn daarom geschikt voor colorimetrische eiwittesten of het detecteren van de dichtheid van een bacteriecultuur, maar niet voor het detecteren van de concentratie en zuiverheid van nucleïnezuren in het UV-bereik bij 230, 260 en 280 nm. Kwarts en andere UV-compatibele polymeren zijn daarentegen meestal transparant in zowel zichtbaar als ultraviolet licht, waardoor ze ideaal zijn voor het meten van UV-lichtmonsters.
Zowel een cuvet als een microvolume-adapter hebben voor- en nadelen. Hier zijn enkele ideeën om u te helpen het juiste vat te kiezen voor het nauwkeurig en consistent meten van uw monsters.
Cuvetten
Afhankelijk van het instrument nemen spectrofotometers metingen bij een van de drie lichthoogten van de optische bundel (de afstand vanaf de onderkant van de cuvet, ook wel Z-dimensie of lichthoogte genoemd): 8,5, 15 of 20 mm. De meeste spectrofotometers accepteren macrocuvetten omdat ze een rechte wand hebben. Microcuvetten daarentegen hebben dezelfde buitenste voetafdruk als standaardcuvetten, maar hun binnenkant is over het algemeen taps toelopend om de benodigde hoeveelheid monstermateriaal te beperken. De standaardcuvet daarentegen is bedoeld om op een bepaalde lichte hoogte in de kamer door het monster te meten. Het is van cruciaal belang om nogmaals te controleren of de cuvette Z-afmeting die u gebruikt om uw monster te meten, compatibel is met de lichthoogte van uw instrument. Houd rekening met de volgende belangrijke kenmerken van cuvetten:
- Bij het meten van materialen met lage concentraties, zoals RNA, enkelstrengs DNA en oligonucleotiden, hebt u een padlengte nodig die lang genoeg is om de waarden binnen het lineaire meetbereik van het instrument te houden. Hoewel sommige cuvetten die nu op de markt zijn een alternatieve padlengte toestaan, is de standaardmaat 10 mm. Sommige cuvetten met dubbele padlengte kunnen 90 graden worden gedraaid voor een meting bij een andere padlengte.
- Het is aan te raden om een steriele, wegwerpbare plastic cuvet te gebruiken als u uw monster na een meting wilt ophalen. Hoewel bulkcuvetten beschikbaar zijn, kunnen voor sommige toepassingen afzonderlijk verpakte, steriele cuvetten nodig zijn die gecertificeerd eiwitvrij of nucleasevrij zijn.
- De absorptie van een monster bij een golflengte van 600 nm, gewoonlijk de “OD600” genoemd, wordt gebruikt om de concentratie van een bacteriecultuur te schatten. Dankzij de grotere monstercapaciteit van een macrocuvette kunnen heterogene monsters zoals deze een nauwkeurigere uitlezing produceren.
Een standaard spectrofotometer kan verschillende cuvetten bevatten, evenals een microvolume-adapter. Het type monster, het gebruikte volume, de padlengte en de transparantie van het cuvettemateriaal hebben allemaal invloed op het gebruikte cuvetvolume, waardoor wetenschappers de vrijheid hebben om hun experimenten consistent en correct uit te voeren. Dus overloop de keuzes die we hebben besproken, selecteer de golflengte en padlengte en begin met meten!
Recent Comments