Wybór odpowiedniej objętości do pomiaru próbek
Spektrofotometr idealnie nadaje się do określania, w jakim stopniu materiał pochłania lub przepuszcza światło o określonej długości fali, co skutkuje uzyskaniem informacji o stężeniu i czystości. W normalnym laboratorium badawczym spektrofotometr zawiera komorę o standardowej wielkości, do której wkładana jest kuweta , pozwalająca określonej długości fali światła przebyć ustaloną odległość przez próbkę, znaną jako długość ścieżki. Wybierając odpowiednią kuwetę do próbek i zastosowań, należy wziąć pod uwagę rodzaj próbki, zapotrzebowanie na objętość, poziomy stężeń i pomiary, które należy wykonać.
Wybierając kuwetę, należy wziąć pod uwagę trzy możliwości:
- Kuweta makro wymaga pojemności pomiarowej od 3,5 do 35 ml.
- Konwencjonalna kuweta ma pojemność pomiarową 3,5 ml.
- Adapter do mikroobjętości wymaga próbek w zakresie pojedynczych mikrolitrów, zwykle od 2ul do 3,5mL.
Macro Cuvettes
New cuvettes and cells with updated stocks with volume >3.5mL.
Standard Cuvettes
New cuvettes with updated stocks 3.5mL.
Micro Cuvettes
New cuvettes with updated stocks <3.5mL.
Niezbędne jest również upewnienie się, że wybrana kuweta jest przezroczysta dla długości fal, których będziesz używać do testowania próbek. Chociaż szkło i polistyren są na ogół przezroczyste dla światła widzialnego, pochłaniają światło UV. Szkło i polistyren są zatem odpowiednie do kolorymetrycznych oznaczeń białek lub wykrywania gęstości hodowli bakteryjnej, ale nie do wykrywania stężenia i czystości kwasów nukleinowych w zakresie UV przy 230, 260 i 280 nm. Z drugiej strony kwarc i inne polimery kompatybilne z promieniowaniem UV są zwykle przezroczyste zarówno w świetle widzialnym, jak i ultrafioletowym, co czyni je idealnymi do pomiaru próbek w świetle UV.
Zarówno kuweta, jak i adapter do mikroobjętości mają zalety i wady. Oto kilka pomysłów, które pomogą Ci wybrać odpowiednie naczynie do dokładnego i spójnego pomiaru próbek.
Kuwety
W zależności od przyrządu spektrofotometry wykonują pomiary na jednej z trzech wysokości światła wiązki optycznej (odległość od dna kuwety, zwana również wymiarem Z lub wysokością światła): 8,5, 15 lub 20 mm. Większość spektrofotometrów akceptuje kuwety makro, ponieważ mają prostą ściankę. Z drugiej strony, mikrokuwety mają taki sam ślad zewnętrzny jak kuwety standardowe, ale ich wnętrze jest na ogół zwężane, aby ograniczyć ilość potrzebnego materiału próbki. Z drugiej strony standardowa kuweta jest przeznaczona do pomiaru przez próbkę na określonej wysokości światła w komorze. Bardzo ważne jest, aby dokładnie sprawdzić, czy wymiar Z kuwety, którego używasz do pomiaru próbki, jest zgodny z wysokością światła instrumentu. Rozważ następujące kluczowe cechy kuwet:
- Podczas pomiaru materiałów o niskich stężeniach, takich jak RNA, jednoniciowy DNA i oligonukleotydy, potrzebna jest wystarczająco długa ścieżka, aby utrzymać wartości w liniowym zakresie pomiarowym przyrządu. Chociaż niektóre kuwety dostępne obecnie na rynku umożliwiają alternatywną długość ścieżki, standardowy rozmiar to 10 mm. Niektóre kuwety o dwóch ścieżkach mogą być obracane o 90 stopni w celu odczytu na innej długości ścieżki.
- Zaleca się użycie sterylnej, jednorazowej plastikowej kuwety, jeśli chcesz pobrać próbkę po pomiarze. Chociaż kuwety zbiorcze są dostępne, niektóre aplikacje mogą wymagać indywidualnie zapakowanych, sterylnych kuwet, które są certyfikowane jako wolne od białek lub nukleaz.
- Absorbancja próbki przy długości fali 600 nm, zwykle określana jako „OD600”, jest wykorzystywana do oszacowania stężenia kultury bakteryjnej. Większa pojemność próbki kuwety makro pozwala takim niejednorodnym próbkom na uzyskanie dokładniejszego odczytu.
Standardowy spektrofotometr może pomieścić różne kuwety, a także adapter do mikroobjętości. Rodzaj próbki, wykorzystywana objętość, długość ścieżki i przezroczystość materiału kuwety mają wpływ na objętość używanej kuwety, dając naukowcom swobodę przeprowadzania ich eksperymentów w sposób spójny i prawidłowy. Więc przejrzyj omówione przez nas opcje, wybierz długość fali i długość ścieżki i zacznij mierzyć!
Recent Comments