Fluoreszcens küvettatisztítás
Fontos:
Győződjön meg arról, hogy a küvettában maradt minta/oldat nem reagál hevesen a tisztításhoz használt oldattal/folyadékkal!
Ne használjon erős bázisokat, például kálium- vagy nátrium-hidroxidot. Károsíthatják a küvettákat.
A. Kis molekulatömegű vízoldható minták
1) Öblítse le tisztított vízzel.
2) Ezután öblítse le acetonnal vagy etanollal.
3) Fújja szárazra tiszta, száraz, sűrített levegővel vagy nitrogénnel.
4) Tisztítsa meg a küvetta külsejét acetonnal vagy etanollal megnedvesített lencsetisztító papírral.
Ügyeljen arra, hogy ne képződjön nyomás a küvettában. Ne használjon otthoni levegőt szűrő felszerelése nélkül. Ez gyakran elegendő a küvetta belsejének megtisztításához.
Ehhez használhat küvettamosót is, ha van. A küvetta centrifugát nem ajánlom szárításra.
B. Biomakromolekulák
A különösen denaturált fehérjék nagyon ragadósak lehetnek, és a kvarcfelületekről való eltávolításuk gyakran agresszívabb tisztítási módszereket igényel. Az alábbiakban három módszert sorolunk fel. Előfordulhat, hogy egynél többet kell kipróbálnia, mielőtt a küvetta tiszta lesz.
I. Egyes szállítók saját márkájú küvettatisztító szereket szállítanak, általában 9,5 és 12 közötti pH-tartományú anionos és nemionos tisztítószerek oldatait.
Weboldalaik útmutatást adnak a küvettatisztításhoz, és az ajánlott protokolljaik jók. Ezek azonban nem mindig elegendőek ahhoz, hogy eltávolítsák a fehérjét a küvetta felületéről.
II. “Nano Strip” (a Cyantek-től)
Viseljen laborköpenyt, védőszemüveget, kesztyűt, zárt orrú cipőt és hosszú nadrágot, miközben páraelszívóban dolgozik! A Nano Strip használatához kövesse az alábbi salétromsav protokollt a Nano Strip használatával. Legyen óvatos, a műanyag pipetták vagy lapos gélbetöltő hegyek nem bírják a nanocsíkot.
III. Salétromsav
Viseljen laborköpenyt, védőszemüveget, kesztyűt, zárt orrú cipőt és hosszú nadrágot, miközben páraelszívóban dolgozik!
- Használat után vegye ki a küvettát a tartóból, és vegye ki a lehető legtöbb mintát egy finom végű eldobható transzferpipetta vagy egy mikroküvettákhoz való gélbetöltő hegy segítségével.
- Öblítse le négyszer vagy ötször pufferrel vagy tisztított vízzel (pufferöblítést használnak a tisztított vízben kicsapódó fehérjéket tartalmazó minták esetében). Ha pufferes öblítést használ, azt további tisztított vízzel történő öblítésnek kell követnie.
- Öblítse le többször acetonnal vagy etanollal, majd szárítsa meg alaposan tiszta, száraz sűrített levegővel vagy nitrogénnel.
Jegyzet:
Ehhez használhat küvettamosót is, ha van. A küvetta centrifugát nem ajánlom szárításra.
Különösen fontos, hogy a küvetta teljesen megszáradjon a következő lépés előtt. Ha nem, akkor a sav vízzel vagy etanollal való keveréséből származó hő károsíthatja a küvettát! Folytassa az átlátszó küvetta vagy a fekete tükröződésgátló bevonatú küvetta alábbi lépéseivel.
Átlátszó küvetták (nincs fekete bevonat kívül)
- Merítse tömény salétromsavba, ügyelve arra, hogy a küvettában lévő levegőt a sav teljesen kiszorítsa.
Vigyázat:
Győződjön meg arról, hogy a savat tartalmazó edényen egyértelműen fel van tüntetve annak tartalma, és biztonságos helyen tárolják. Ügyeljen arra, hogy a küvetta ne sérüljön meg az edény mozgatása közben.
- Hagyja ázni a küvettát 10 perctől 30 percig (vagy egy éjszakán át 2 M salétromsavval, vagy Nano-Strip áztatás esetén 30 percig).
- Csepegtetőtálcán óvatosan távolítsa el a küvettát a savból rozsdamentes csipesszel, a küvettát enyhén a nyakánál fogva, ne az optikai felületeknél.
- Finom végű eldobható transzferpipetta vagy gélbetöltő hegyek segítségével óvatosan távolítsa el a lehető legtöbb sav mennyiségét a küvettából. (A Nano-Strip ismét nem kompatibilis a műanyag pipettákkal)
- Óvatosan öblítse ki a küvettát tisztított vízzel többször.
- Legalább 7 öblítés után mérje meg a vízzel töltött küvetta fluoreszcencia spektrumát annak bizonyítására, hogy az tiszta, azokkal a paraméterekkel, amelyeket annak a mintának a mérésére használna, amelyből a szennyeződés származott.
- Öblítse ki a tiszta küvettát acetonnal vagy etanollal, és szárítsa meg.
- Tisztítsa meg a küvetta külsejét acetonnal vagy etanollal megnedvesített lencsetisztító papírral. A fény felé tartva ellenőrizze, hogy a küvetta tiszta-e. Nem lehet látható szennyeződés vagy elkenődés.
- Ha nincs rá azonnal szükség, tárolja a küvettát tiszta, száraz környezetben.
Küvetta fekete tükröződésmentes bevonattal a külső oldalán
Ne merítse a bevonatos küvettákat salétromsavba. Az erős savak (és bizonyos oldószerek) rontják a bevonatot.
- Töltse fel a küvettát savval, ügyelve arra, hogy ne csöpögjön a külső felületére transzferpipetta vagy pipettahegy segítségével. Kerülje a fém fecskendőtűket vagy üveget, mert megkarcolhatják a küvettát.
- Győződjön meg arról, hogy a küvettában lévő levegőt teljesen kiszorítja a sav.
Vigyázat:
Győződjön meg arról, hogy a savat tartalmazó edényen egyértelműen fel van tüntetve annak tartalma, és biztonságos helyen tárolják. Ügyeljen arra, hogy a küvetta ne sérüljön meg az edény mozgatása közben.
- Hagyja ázni 10 perctől 30 percig (vagy egy éjszakán át 2 M salétromsavval) (Nano-Strip esetén 30 perc elegendőnek kell lennie).
- Finom végű eldobható transzferpipetta vagy gélbetöltő hegyek segítségével óvatosan távolítsa el a lehető legtöbb sav mennyiségét a küvettából. (A Nano-Strip ismét nem kompatibilis a műanyag pipettákkal)
- Óvatosan öblítse ki a küvettát tisztított vízzel többször.
- Legalább 7 öblítés után mérje meg a vízzel töltött küvetta fluoreszcencia spektrumát annak bizonyítására, hogy az tiszta, azokkal a paraméterekkel, amelyeket annak a mintának a mérésére használna, amelyből a szennyeződés származott.
- Öblítse ki a tiszta küvettát acetonnal vagy etanollal, és szárítsa meg.
- Finoman tisztítsa meg a küvetta külsejét acetonnal vagy etanollal, puha, szöszmentes törlőkendővel. A fény felé tartva ellenőrizze, hogy a küvetta tiszta-e. Nem lehet látható szennyeződés vagy elkenődés.
- Ha nincs rá azonnal szükség, tárolja a küvettát tiszta, száraz környezetben.
Recent Comments