Auswahl des geeigneten Volumens zum Messen Ihrer Proben
Ein Spektralfotometer ist ideal, um zu bestimmen, wie stark ein Material eine bestimmte Lichtwellenlänge absorbiert oder durchlässt, was zu Konzentrations- und Reinheitsinformationen führt. In einem normalen Forschungslabor umfasst ein Spektralfotometer eine Kammer in Standardgröße, in die eine Küvette eingeführt wird, die es einer bestimmten Lichtwellenlänge ermöglicht, eine festgelegte Strecke durch die Probe zu wandern, die als Weglänge bekannt ist. Berücksichtigen Sie bei der Auswahl der richtigen Küvette für Ihre Proben und Anwendungen den Probentyp, den Volumenbedarf, die Konzentration und die durchzuführenden Messungen.
Bei der Auswahl einer Küvette sind drei Möglichkeiten zu berücksichtigen:
- Eine Makroküvette benötigt eine Messkapazität von 3,5 bis 35 ml.
- Eine herkömmliche Küvette hat eine Messkapazität von 3,5 ml.
- Ein Mikrovolumenadapter erfordert Proben im Mikroliterbereich, normalerweise zwischen 2 ul und 3,5 ml.
Macro Cuvettes
Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm
(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
Es ist auch wichtig sicherzustellen, dass die von Ihnen gewählte Küvette für die Wellenlängen transparent ist, die Sie zum Testen Ihrer Proben verwenden werden. Obwohl Glas und Polystyrol im Allgemeinen für sichtbares Licht transparent sind, absorbieren sie UV-Licht. Glas und Polystyrol eignen sich daher für kolorimetrische Proteinassays oder die Bestimmung der Dichte einer Bakterienkultur, nicht jedoch für die Bestimmung der Konzentration und Reinheit von Nukleinsäuren im UV-Bereich bei 230, 260 und 280 nm. Quarz und andere UV-kompatible Polymere hingegen sind normalerweise sowohl im sichtbaren als auch im ultravioletten Licht transparent, was sie ideal für die Messung von UV-Licht-Proben macht.
Sowohl eine Küvette als auch ein Mikrovolumenadapter haben Vor- und Nachteile. Hier sind einige Ideen, die Ihnen bei der Auswahl des richtigen Gefäßes für die genaue und konsistente Messung Ihrer Proben helfen sollen.
Küvetten
Je nach Instrument messen Spektralfotometer bei einer von drei Lichtstrahlhöhen (der Abstand vom Boden der Küvette, auch bekannt als Z-Maß oder Lichthöhe): 8,5, 15 oder 20 mm. Die meisten Spektralphotometer akzeptieren Makroküvetten, da sie eine gerade Wand haben. Mikroküvetten hingegen haben die gleiche äußere Grundfläche wie Standardküvetten, aber ihr Inneres ist im Allgemeinen verjüngt, um die Menge des erforderlichen Probenmaterials zu begrenzen. Die Standardküvette hingegen soll bei einer bestimmten Lichthöhe in der Kammer durch die Probe hindurch messen. Es ist wichtig, noch einmal zu überprüfen, ob die Z-Abmessung der Küvette, die Sie zum Messen Ihrer Probe verwenden, mit der Lichthöhe Ihres Instruments kompatibel ist. Beachten Sie die folgenden Hauptmerkmale von Küvetten:
- Bei der Messung von Materialien mit niedrigen Konzentrationen, wie z. B. RNA, einzelsträngige DNA und Oligonukleotide, benötigen Sie eine ausreichend lange Pfadlänge, um die Werte innerhalb des linearen Messbereichs des Instruments zu halten. Obwohl einige Küvetten, die derzeit auf dem Markt sind, eine alternative Weglänge zulassen, beträgt die Standardgröße 10 mm. Einige Küvetten mit zwei Schichtdicken können um 90 Grad gedreht werden, um bei einer anderen Schichtdicke abzulesen.
- Es wird empfohlen, eine sterile Einwegküvette aus Kunststoff zu verwenden, wenn Sie Ihre Probe nach einer Messung entnehmen möchten. Obwohl Bulk-Küvetten erhältlich sind, benötigen einige Anwendungen möglicherweise einzeln verpackte, sterile Küvetten, die als proteinfrei oder nukleasefrei zertifiziert sind.
- Die Extinktion einer Probe bei einer Wellenlänge von 600 nm, üblicherweise als „OD600“ bezeichnet, wird verwendet, um die Konzentration einer Bakterienkultur abzuschätzen. Die größere Probenkapazität einer Makroküvette ermöglicht es, heterogene Proben wie diese genauer abzulesen.
Ein Standard-Spektrophotometer kann eine Vielzahl von Küvetten sowie einen Mikrovolumenadapter aufnehmen. Der Probentyp, das verwendete Volumen, die Weglänge und die Transparenz des Küvettenmaterials wirken sich alle auf das verwendete Küvettenvolumen aus und geben Wissenschaftlern die Freiheit, ihre Experimente konsistent und korrekt durchzuführen. Gehen Sie also die besprochenen Optionen durch, wählen Sie die Wellenlänge und die Pfadlänge aus und beginnen Sie mit der Messung!
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