Elegir el volumen adecuado para medir sus muestras
Un espectrofotómetro es ideal para determinar cuánto absorbe o transmite un material una determinada longitud de onda de luz, lo que da como resultado información sobre la concentración y la pureza. En un laboratorio de investigación normal, un espectrofotómetro incluye una cámara de tamaño estándar en la que se inserta una cubeta , lo que permite que una cierta longitud de onda de luz viaje una distancia determinada a través de la muestra, conocida como longitud del camino. Al elegir la cubeta adecuada para sus muestras y aplicaciones, tenga en cuenta el tipo de muestra, las necesidades de volumen, los niveles de concentración y las medidas que se van a tomar.
Al elegir una cubeta, hay tres opciones a considerar:
- Una cubeta macro necesita una capacidad de medición de 3,5 a 35 ml.
- Una cubeta convencional tiene una capacidad de medición de 3,5 mL.
- Un adaptador de microvolumen requiere muestras que estén en el rango de un solo microlitro, generalmente entre 2 ul y 3,5 ml.
Macro Cuvettes
Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm
(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
También es esencial asegurarse de que la cubeta que elija sea transparente a las longitudes de onda que usará para analizar sus muestras. Aunque el vidrio y el poliestireno son generalmente transparentes a la luz visible, absorben la luz ultravioleta. Por lo tanto, el vidrio y el poliestireno son apropiados para ensayos colorimétricos de proteínas o para detectar la densidad de un cultivo bacteriano, pero no para detectar la concentración y la pureza de los ácidos nucleicos en el rango UV a 230, 260 y 280 nm. El cuarzo y otros polímeros compatibles con UV, por otro lado, suelen ser transparentes tanto a la luz visible como a la ultravioleta, lo que los hace ideales para medir muestras de luz UV.
Tanto una cubeta como un adaptador de microvolumen tienen ventajas y desventajas. Aquí hay algunas ideas para ayudarlo a elegir el recipiente adecuado para medir sus muestras de manera precisa y consistente.
Cubetas
Según el instrumento, los espectrofotómetros toman medidas a una de las tres alturas de luz del haz óptico (la distancia desde el fondo de la cubeta, también conocida como dimensión Z o altura de la luz): 8,5, 15 o 20 mm. La mayoría de los espectrofotómetros aceptarán macrocubetas ya que tienen una pared recta. Las microcubetas, por otro lado, tienen el mismo espacio exterior que las cubetas estándar, pero sus interiores generalmente están ahusados para limitar la cantidad de material de muestra necesario. La cubeta estándar, por otro lado, está diseñada para medir a través de la muestra a una altura de luz particular en la cámara. Es fundamental verificar dos veces que la dimensión Z de la cubeta que utiliza para medir su muestra sea compatible con la altura de la luz de su instrumento. Considere las siguientes características clave de las cubetas:
- Al medir materiales con concentraciones bajas, como ARN, ADN monocatenario y oligonucleótidos, necesitará una longitud de ruta lo suficientemente larga para mantener los valores dentro del rango de medición lineal del instrumento. Aunque algunas cubetas ahora en el mercado permiten una longitud de paso alternativa, el tamaño estándar es de 10 mm. Algunas cubetas de longitud de trayectoria dual se pueden girar 90 grados para una lectura en otra longitud de trayectoria.
- Se recomienda utilizar una cubeta de plástico desechable estéril si desea recuperar su muestra después de una medición. Aunque hay cubetas a granel disponibles, algunas aplicaciones pueden necesitar cubetas estériles envueltas individualmente que estén certificadas sin proteínas o sin nucleasas.
- La absorbancia de una muestra a una longitud de onda de 600 nm, generalmente denominada “OD600”, se utiliza para estimar la concentración de un cultivo bacteriano. La mayor capacidad de muestra de una cubeta macro permite que muestras heterogéneas como estas produzcan una lectura más precisa.
Un espectrofotómetro estándar puede contener una variedad de cubetas, así como un adaptador de microvolumen. El tipo de muestra, el volumen utilizado, la longitud de la trayectoria y la transparencia del material de la cubeta tienen un impacto en el volumen de la cubeta utilizado, lo que brinda a los científicos la libertad de ejecutar sus experimentos de manera consistente y correcta. Así que revise las opciones que discutimos, seleccione la longitud de onda y la longitud del camino, ¡y comience a medir!
Recent Comments