Scelta del volume adatto per misurare i campioni
Uno spettrofotometro è l’ideale per determinare quanto un materiale assorbe o trasmette una determinata lunghezza d’onda della luce, ottenendo informazioni sulla concentrazione e sulla purezza. In un normale laboratorio di ricerca, uno spettrofotometro include una camera di dimensioni standard in cui è inserita una cuvetta , consentendo a una certa lunghezza d’onda della luce di percorrere una determinata distanza attraverso il campione, nota come lunghezza del percorso. Quando si sceglie la cuvetta giusta per i campioni e le applicazioni, considerare il tipo di campione, le esigenze di volume, i livelli di concentrazione e le misurazioni da effettuare.
Quando si sceglie una cuvetta, ci sono tre scelte da considerare:
- Una cuvetta macro richiede una capacità di misurazione da 3,5 a 35 ml.
- Una cuvetta convenzionale ha una capacità di misurazione di 3,5 ml.
- Un adattatore per microvolume richiede campioni che rientrino nell’intervallo di un singolo microlitro, di solito tra 2ul e 3,5 ml.
Macro Cuvettes
Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm

(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
È inoltre essenziale assicurarsi che la cuvetta scelta sia trasparente alle lunghezze d’onda che verranno utilizzate per testare i campioni. Sebbene il vetro e il polistirolo siano generalmente trasparenti alla luce visibile, assorbono la luce UV. Il vetro e il polistirene sono quindi appropriati per saggi proteici colorimetrici o per rilevare la densità di una coltura batterica, ma non per rilevare la concentrazione e la purezza degli acidi nucleici nell’intervallo UV a 230, 260 e 280 nm. Il quarzo e altri polimeri compatibili con i raggi UV, d’altra parte, sono generalmente trasparenti sia alla luce visibile che a quella ultravioletta, il che li rende ideali per misurare i campioni di luce UV.
Sia una cuvetta che un adattatore per microvolume presentano vantaggi e svantaggi. Ecco alcune idee per aiutarti a scegliere il recipiente giusto per misurare i tuoi campioni in modo accurato e coerente.
cuvette
A seconda dello strumento, gli spettrofotometri effettuano misurazioni a una delle tre altezze di luce del fascio ottico (la distanza dal fondo della cuvetta, nota anche come dimensione Z o altezza della luce): 8,5, 15 o 20 mm. La maggior parte degli spettrofotometri accetterà cuvette macro poiché hanno una parete diritta. Le micro cuvette, d’altra parte, hanno la stessa impronta esterna delle cuvette standard, ma i loro interni sono generalmente rastremati per limitare la quantità di materiale campione necessario. La cuvetta standard, invece, ha lo scopo di misurare attraverso il campione a una particolare altezza della luce nella camera. È fondamentale ricontrollare che la dimensione Z della cuvetta utilizzata per misurare il campione sia compatibile con l’altezza della luce dello strumento. Considerare le seguenti caratteristiche chiave delle cuvette:
- Quando si misurano materiali con basse concentrazioni, come RNA, DNA a filamento singolo e oligonucleotidi, è necessario un percorso sufficientemente lungo per mantenere i valori all’interno dell’intervallo di misurazione lineare dello strumento. Sebbene alcune cuvette ora sul mercato consentano una lunghezza del percorso alternativa, la dimensione standard è di 10 mm. Alcune cuvette a doppia lunghezza di percorso possono essere ruotate di 90 gradi per una lettura a un’altra lunghezza di percorso.
- Si consiglia di utilizzare una cuvetta di plastica sterile monouso se si desidera recuperare il campione dopo una misurazione. Sebbene siano disponibili cuvette sfuse, alcune applicazioni potrebbero richiedere cuvette sterili confezionate singolarmente, certificate prive di proteine o nucleasi.
- L’assorbanza di un campione a una lunghezza d’onda di 600 nm, solitamente indicata come “OD600”, viene utilizzata per stimare la concentrazione di una coltura batterica. La maggiore capacità di campionamento di una cuvetta macro consente a campioni eterogenei come questi di produrre una lettura più accurata.
Uno spettrofotometro standard può contenere una varietà di cuvette, nonché un adattatore per microvolume. Il tipo di campione, il volume utilizzato, la lunghezza del percorso e la trasparenza del materiale della cuvetta influiscono sul volume della cuvetta utilizzata, offrendo agli scienziati la libertà di eseguire i propri esperimenti in modo coerente e corretto. Quindi esamina le scelte che abbiamo discusso, seleziona la lunghezza d’onda e la lunghezza del percorso e inizia a misurare!
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