Choisir le volume approprié pour mesurer vos échantillons
Un spectrophotomètre est idéal pour déterminer dans quelle mesure un matériau absorbe ou transmet une certaine longueur d’onde de lumière, ce qui donne des informations sur la concentration et la pureté. Dans un laboratoire de recherche normal, un spectrophotomètre comprend une chambre de taille standard dans laquelle une cuvette est insérée, permettant à une certaine longueur d’onde de la lumière de parcourir une distance définie à travers l’échantillon, appelée longueur du trajet. Lorsque vous choisissez la bonne cuvette pour vos échantillons et vos applications, tenez compte du type d’échantillon, des besoins en volume, des niveaux de concentration et des mesures à prendre.
Lors du choix d’une cuvette, il y a trois choix à considérer :
- Une macro cuvette nécessite une capacité de mesure de 3,5 à 35 ml.
- Une cuvette conventionnelle a une capacité de mesure de 3,5 mL.
- Un adaptateur de microvolume nécessite des échantillons qui se situent dans la plage d’un seul microlitre, généralement entre 2 ul et 3,5 ml.
Macro Cuvettes
Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm
(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
Il est également essentiel de s’assurer que la cuvette que vous choisissez est transparente aux longueurs d’onde que vous utiliserez pour tester vos échantillons. Bien que le verre et le polystyrène soient généralement transparents à la lumière visible, ils absorbent la lumière UV. Le verre et le polystyrène conviennent donc aux dosages colorimétriques de protéines ou à la détection de la densité d’une culture bactérienne, mais pas à la détection de la concentration et de la pureté des acides nucléiques dans la gamme UV à 230, 260 et 280 nm. Le quartz et d’autres polymères compatibles avec les UV, d’autre part, sont généralement transparents à la lumière visible et ultraviolette, ce qui les rend idéaux pour mesurer des échantillons de lumière UV.
Une cuvette et un adaptateur de microvolume présentent tous deux des avantages et des inconvénients. Voici quelques idées pour vous aider à choisir le bon récipient pour mesurer vos échantillons avec précision et cohérence.
Cuves
Selon l’instrument, les spectrophotomètres prennent des mesures à l’une des trois hauteurs de lumière du faisceau optique (la distance depuis le fond de la cuvette, également appelée dimension Z ou hauteur de lumière) : 8,5, 15 ou 20 mm. La plupart des spectrophotomètres acceptent les macrocuvettes car elles ont une paroi droite. Les microcuvettes, d’autre part, ont la même empreinte extérieure que les cuvettes standard, mais leurs intérieurs sont généralement effilés pour limiter la quantité de matériau d’échantillon nécessaire. La cuvette standard, d’autre part, est destinée à mesurer à travers l’échantillon à une hauteur de lumière particulière dans la chambre. Il est essentiel de revérifier que la dimension Z de la cuvette que vous utilisez pour mesurer votre échantillon est compatible avec la hauteur de lumière de votre instrument. Considérez les caractéristiques clés suivantes des cuvettes :
- Lors de la mesure de matériaux à faible concentration, tels que l’ARN, l’ADN simple brin et les oligonucléotides, vous aurez besoin d’un trajet suffisamment long pour maintenir les valeurs dans la plage de mesure linéaire de l’instrument. Bien que certaines cuvettes actuellement sur le marché permettent une longueur de trajet alternative, la taille standard est de 10 mm. Certaines cuvettes à double longueur de trajet peuvent être tournées de 90 degrés pour une lecture à une autre longueur de trajet.
- Il est recommandé d’utiliser une cuvette en plastique jetable stérile si vous souhaitez récupérer votre échantillon après une mesure. Bien que des cuves en vrac soient disponibles, certaines applications peuvent nécessiter des cuves stériles emballées individuellement et certifiées sans protéines ou sans nucléases.
- L’absorbance d’un échantillon à une longueur d’onde de 600 nm, généralement appelée “OD600”, est utilisée pour estimer la concentration d’une culture bactérienne. La plus grande capacité d’échantillonnage d’une macrocuvette permet à des échantillons hétérogènes comme ceux-ci de produire une lecture plus précise.
Un spectrophotomètre standard peut contenir une variété de cuvettes, ainsi qu’un adaptateur de microvolume. Le type d’échantillon, le volume utilisé, la longueur du trajet et la transparence du matériau de la cuvette ont tous un impact sur le volume de la cuvette utilisée, donnant aux scientifiques la liberté d’exécuter leurs expériences de manière cohérente et correcte. Passez donc en revue les choix dont nous avons discuté, sélectionnez la longueur d’onde et la longueur du trajet, et commencez à mesurer !
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