Sopivan tilavuuden valitseminen näytteiden mittaamiseen
Spektrofotometri on ihanteellinen määrittämään, kuinka paljon materiaali absorboi tai läpäisee tietyn aallonpituuden valoa, mikä johtaa pitoisuus- ja puhtaustietoihin. Normaalissa tutkimuslaboratoriossa spektrofotometri sisältää vakiokokoisen kammion, johon asetetaan kyvetti , joka sallii tietyn valon aallonpituuden kulkea tietyn matkan näytteen läpi, joka tunnetaan polun pituutena. Kun valitset oikeaa kyvettiä näytteihisi ja sovelluksiisi, ota huomioon näytetyyppi, tilavuustarpeet, pitoisuustasot ja suoritettavat mittaukset.
Kyvettiä valittaessa on otettava huomioon kolme vaihtoehtoa:
- Makrokyvetti vaatii 3,5-35 ml:n mittauskapasiteetin.
- Perinteisen kyvetin mittauskapasiteetti on 3,5 ml.
- Mikrotilavuuden sovitin vaatii näytteitä, jotka ovat yhden mikrolitran alueella, yleensä 2 ul – 3,5 ml.
Macro Cuvettes
New cuvettes and cells with updated stocks with volume >3.5mL.
Standard Cuvettes
New cuvettes with updated stocks 3.5mL.
Micro Cuvettes
New cuvettes with updated stocks <3.5mL.
On myös tärkeää varmistaa, että valitsemasi kyvetti on läpinäkyvä aallonpituuksille, joita käytät näytteiden testaamiseen. Vaikka lasi ja polystyreeni ovat yleensä läpinäkyviä näkyvälle valolle, ne absorboivat UV-valoa. Lasi ja polystyreeni ovat siksi sopivia kolorimetrisiin proteiinimäärityksiin tai bakteeriviljelmän tiheyden havaitsemiseen, mutta eivät nukleiinihappojen pitoisuuden ja puhtauden havaitsemiseen UV-alueella 230, 260 ja 280 nm. Kvartsi ja muut UV-yhteensopivat polymeerit sen sijaan ovat yleensä läpinäkyviä sekä näkyvässä että ultraviolettivalossa, joten ne sopivat ihanteellisesti UV-valonäytteiden mittaamiseen.
Sekä kyvetillä että mikrotilavuuden sovittimella on etuja ja haittoja. Tässä on muutamia ideoita, joiden avulla voit valita oikean astian näytteiden tarkkaa ja johdonmukaista mittaamista varten.
Kyvetit
Laitteesta riippuen spektrofotometrit mittaavat yhdellä kolmesta optisen säteen valon korkeudesta (etäisyys kyvetin pohjasta, tunnetaan myös Z-mitana tai valon korkeutena): 8,5, 15 tai 20 mm. Useimmat spektrofotometrit hyväksyvät makrokyvetit, koska niissä on suora seinämä. Mikrokyvettien ulkopinta taas on sama kuin tavallisilla kyvetteillä, mutta niiden sisäosat ovat yleensä suippenevat tarvittavan näytemateriaalin määrän rajoittamiseksi. Tavallinen kyvetti sen sijaan on tarkoitettu mittaamaan näytteen läpi tietyllä valon korkeudella kammiossa. On tärkeää tarkistaa, että näytteen mittaamiseen käyttämäsi kyvetin Z-mitta on yhteensopiva instrumentin valon korkeuden kanssa. Harkitse seuraavia kyvettien tärkeimpiä ominaisuuksia:
- Kun mittaat materiaaleja, joissa on alhainen pitoisuus, kuten RNA, yksijuosteinen DNA ja oligonukleotidit, tarvitset riittävän pitkän polun pituuden, jotta arvot pysyvät instrumentin lineaarisella mittausalueella. Vaikka jotkin nyt markkinoilla olevat kyvetit mahdollistavat vaihtoehtoisen polun pituuden, vakiokoko on 10 mm. Joitakin kaksipolkuisia kyvettejä voidaan kääntää 90 astetta toisen polun pituuden lukemiseksi.
- On suositeltavaa käyttää steriiliä, kertakäyttöistä muovikyvettiä, jos haluat ottaa näytteen mittauksen jälkeen. Vaikka bulkkikyvettejä on saatavilla, jotkin sovellukset saattavat tarvita yksittäin käärittyjä, steriilejä kyvettejä, jotka ovat sertifioituja proteiinittomia tai nukleaasivapaita.
- Näytteen absorbanssia aallonpituudella 600 nm, jota yleensä kutsutaan ”OD600”:ksi, käytetään bakteeriviljelmän pitoisuuden arvioimiseen. Makrokyvetin suurempi näytekapasiteetti mahdollistaa tämän kaltaisten heterogeenisten näytteiden tuottavan tarkemman lukeman.
Tavallinen spektrofotometri voi sisältää useita kyvettejä sekä mikrotilavuussovittimen. Näytteen tyyppi, käytetty tilavuus, polun pituus ja kyvettimateriaalin läpinäkyvyys vaikuttavat kaikki käytettyyn kyvettitilavuuteen, mikä antaa tutkijoille vapauden suorittaa kokeita johdonmukaisesti ja oikein. Joten käy läpi keskustelemamme valinnat, valitse aallonpituus ja polun pituus ja aloita mittaus!
Recent Comments