Välja lämplig volym för att mäta dina prover
En spektrofotometer är idealisk för att bestämma hur mycket ett material absorberar eller överför en viss våglängd av ljus, vilket resulterar i information om koncentration och renhet. I ett vanligt forskningslabb innehåller en spektrofotometer en kammare i standardstorlek där en kyvett sätts in, vilket gör att en viss våglängd av ljus kan resa ett visst avstånd genom provet, känd som väglängden. När du väljer rätt kyvett för dina prover och applikationer, överväg provtyp, volymbehov, koncentrationsnivåer och mätningar som ska göras.
När du väljer en kyvett finns det tre val att tänka på:
- En makrokyvett kräver en mätkapacitet på 3,5 till 35 ml.
- En konventionell kyvett har en mätkapacitet på 3,5 ml.
- En mikrovolymadapter kräver prover som är inom enstaka mikroliters intervall, vanligtvis mellan 2 ul och 3,5 ml.
Macro Cuvettes
New cuvettes and cells with updated stocks with volume >3.5mL.
Standard Cuvettes
New cuvettes with updated stocks 3.5mL.
Micro Cuvettes
New cuvettes with updated stocks <3.5mL.
Det är också viktigt att se till att kyvetten du väljer är genomskinlig för de våglängder du kommer att använda för att testa dina prover. Även om glas och polystyren i allmänhet är transparenta för synligt ljus, absorberar de UV-ljus. Glas och polystyren är därför lämpliga för kolorimetriska proteinanalyser eller detektering av densiteten hos en bakteriekultur, men inte för att detektera koncentrationen och renheten av nukleinsyror i UV-området vid 230, 260 och 280 nm. Kvarts och andra UV-kompatibla polymerer är å andra sidan vanligtvis transparenta i både synligt och ultraviolett ljus, vilket gör dem idealiska för mätning av UV-ljusprover.
Både en kyvett och en mikrovolymadapter har fördelar och nackdelar. Här är några idéer som hjälper dig att välja rätt kärl för att mäta dina prover exakt och konsekvent.
Kyvetter
Beroende på instrument tar spektrofotometrar mätningar vid en av tre optiska ljushöjder (avståndet från kyvettens botten, även känt som Z-dimension eller ljushöjd): 8,5, 15 eller 20 mm. De flesta spektrofotometrar kommer att acceptera makrokyvetter eftersom de har en rak vägg. Mikrokyvetter, å andra sidan, har samma yttre fotavtryck som standardkyvetter, men deras inre är i allmänhet avsmalnande för att begränsa mängden provmaterial som behövs. Standardkyvetten är å andra sidan avsedd att mäta genom provet vid en speciell ljushöjd i kammaren. Det är viktigt att dubbelkolla att kyvettens Z-dimension du använder för att mäta ditt prov är kompatibel med ditt instruments ljushöjd. Tänk på följande nyckelegenskaper hos kyvetter:
- När du mäter material med låga koncentrationer, såsom RNA, enkelsträngat DNA och oligonukleotider, behöver du en tillräckligt lång väglängd för att hålla värdena inom instrumentets linjära mätområde. Även om vissa kyvetter nu på marknaden tillåter en alternativ väglängd, är standardstorleken 10 mm. Vissa kyvetter med dubbla banlängder kan vridas 90 grader för avläsning vid en annan väglängd.
- Det rekommenderas att använda en steril engångsplastkyvett om du vill hämta ditt prov efter en mätning. Även om bulkkyvetter finns tillgängliga, kan vissa applikationer behöva individuellt förpackade, sterila kyvetter som är certifierade proteinfria eller nukleasfria.
- Absorbansen av ett prov vid en våglängd av 600 nm, vanligtvis kallad “OD600”, används för att uppskatta koncentrationen av en bakteriekultur. En makrokyvetts större provkapacitet gör att heterogena prover som dessa ger en mer exakt avläsning.
En standardspektrofotometer kan hålla en mängd olika kyvetter, såväl som en mikrovolymadapter. Provtypen, den använda volymen, väglängden och genomskinligheten för kyvettmaterialet påverkar alla kyvettvolymen som används, vilket ger forskarna friheten att utföra sina experiment konsekvent och korrekt. Så gå igenom de val vi diskuterade, välj våglängd och väglängd och börja mäta!
Recent Comments