Valg af passende volumen til at måle dine prøver
Et spektrofotometer er ideelt til at bestemme, hvor meget et materiale absorberer eller transmitterer en bestemt bølgelængde af lys, hvilket resulterer i information om koncentration og renhed. I et normalt forskningslaboratorium inkluderer et spektrofotometer et kammer i standardstørrelse, hvori en kuvette er indsat, hvilket tillader en vis bølgelængde af lys at rejse en bestemt afstand gennem prøven, kendt som vejlængden. Når du vælger den rigtige kuvette til dine prøver og applikationer, skal du overveje prøvetype, volumenbehov, koncentrationsniveauer og målinger, der skal tages.
Når du vælger en kuvette, er der tre valg at overveje:
- En makrokuvette kræver en målekapacitet på 3,5 til 35 ml.
- En konventionel kuvette har en målekapacitet på 3,5 ml.
- En mikrovolumenadapter kræver prøver, der er i intervallet for enkelt mikroliter, normalt mellem 2 ul til 3,5 ml.
Macro Cuvettes




Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm

(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VFOF10) 0,8mL Kuvette med kort højde, 10×12,5×12,5 mm, 4 vinduer, smeltet, lysvej 10 mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
Det er også vigtigt at sikre, at den kuvette, du vælger, er gennemsigtig for de bølgelængder, du vil bruge til at teste dine prøver. Selvom glas og polystyren generelt er gennemsigtige for synligt lys, absorberer de UV-lys. Glas og polystyren er derfor egnede til kolorimetriske proteinassays eller påvisning af tætheden af en bakteriekultur, men ikke til påvisning af koncentrationen og renheden af nukleinsyrer i UV-området ved 230, 260 og 280 nm. Kvarts og andre UV-kompatible polymerer er på den anden side normalt gennemsigtige i både synligt og ultraviolet lys, hvilket gør dem ideelle til måling af UV-lysprøver.
Både en kuvette og en mikrovolumen adapter har fordele og ulemper. Her er nogle ideer til at hjælpe dig med at vælge det rigtige kar til at måle dine prøver nøjagtigt og konsekvent.
Kuvetter
Afhængigt af instrumentet tager spektrofotometre målinger ved en af tre optiske lyshøjder (afstanden fra bunden af kuvetten, også kendt som Z-dimension eller lyshøjde): 8,5, 15 eller 20 mm. De fleste spektrofotometre vil acceptere makrokuvetter, da de har en lige væg. Mikrokuvetter har på den anden side samme ydre fodaftryk som standardkuvetter, men deres indre er generelt tilspidsede for at begrænse mængden af prøvemateriale, der er nødvendig. Standardkuvetten er på den anden side beregnet til at måle gennem prøven i en særlig lyshøjde i kammeret. Det er vigtigt at dobbelttjekke, at den kuvette Z-dimension, du bruger til at måle din prøve, er kompatibel med dit instruments lyshøjde. Overvej følgende nøgleegenskaber ved kuvetter:
- Når du måler materialer med lave koncentrationer, såsom RNA, enkeltstrenget DNA og oligonukleotider, skal du have en lang nok vejlængde til at holde værdierne inden for instrumentets lineære måleområde. Selvom nogle kuvetter nu på markedet tillader en alternativ vejlængde, er standardstørrelsen 10 mm. Nogle kuvetter med dobbelt vejlængde kan drejes 90 grader for aflæsning ved en anden vejlængde.
- Det anbefales at bruge en steril engangsplastikcuvette, hvis du ønsker at hente din prøve efter en måling. Selvom bulkcuvetter er tilgængelige, kan nogle applikationer have behov for individuelt indpakkede, sterile kuvetter, der er certificeret proteinfri eller nukleasefri.
- Absorbansen af en prøve ved en bølgelængde på 600 nm, sædvanligvis omtalt som “OD600”, bruges til at estimere koncentrationen af en bakteriekultur. En makrokuvettes større prøvekapacitet gør det muligt for heterogene prøver som disse at producere en mere nøjagtig udlæsning.
Et standard spektrofotometer kan indeholde en række kuvetter såvel som en mikrovolumenadapter. Prøvetypen, det anvendte volumen, vejlængden og gennemsigtigheden af kuvettematerialet påvirker alle det anvendte kuvettevolumen, hvilket giver forskerne frihed til at udføre deres eksperimenter konsekvent og korrekt. Så gennemgå de valg, vi diskuterede, vælg bølgelængde og vejlængde, og begynd at måle!
Recent Comments