Limpeza de Fluorescence Cuvette
Importante:
Certifique-se de que qualquer amostra/solução que possa ter deixado na sua cuvette não reagirá violentamente com qualquer solução/líquido que utilizar para a limpeza!
Não utilize bases fortes como potássio ou hidróxido de sódio. Podem danificar as cuvetas.
A. Amostras solúveis em
água de baixo peso molecular 1) Enxaguar com água purificada.
2) Enxaguar com acetona ou etanol.
3) Seque-se com ar limpo, seco, comprimido ou azoto.
4) Limpe o exterior da cuvette limpando suavemente com papel de limpeza de lentes humedeado com acetona ou etanol.
Certifique-se de que não aumenta a pressão na cuvette. Não use ar da casa sem ter um filtro instalado. Isto é muitas vezes suficiente para limpar o interior da cuvette.
Você também pode usar uma anilha de cuvette para isso se você tiver uma. Não recomendo centrifugadoras de cuvette para secar.
B. Biomacromoleléculas
As proteínas particularmente desnaturadas podem ser bastante pegajosas e a sua remoção das superfícies de quartzo muitas vezes precisa de métodos de limpeza mais agressivos. Três métodos estão listados abaixo. Podes ter de experimentar mais do que um deles antes que a tua cuvette esteja limpa.
I. Alguns fornecedores fornecem as suas próprias marcas de produtos de limpeza cuvette, geralmente soluções de detergentes aniónicos e não iónicos na gama de pH 9,5 a 12.
Os seus websites dão orientação sobre a limpeza de cuvette e os protocolos recomendados são bons. No entanto, nem sempre são suficientes para remover proteínas das superfícies cuvette.
II, NÃO, NÃO, NÃO. “Nano Strip” (de Cyantek)
Use casaco de laboratório, óculos, luvas, sapatos de dedos fechados e calças compridas, tudo enquanto trabalha num capuz de fumo! Para utilizar a Nano Strip siga o protocolo ácido nítrico abaixo usando a Nano Strip. Tenha cuidado, as pipetas de transferência de plástico ou as pontas de carregamento de gel plano não se aguentam até à Nano Strip.
III III. Ácido ítrico
Use casaco de laboratório, óculos, luvas, sapatos de dedos fechados e calças compridas, tudo enquanto trabalha num capuz de fumo!
- Após a utilização, retire a cuvette do suporte e retire o máximo possível da amostra utilizando uma pipeta de transferência descartável de ponta fina ou uma ponta de carregamento de gel para micro-cuvetes.
- Enxaguar quatro ou cinco vezes com tampão ou água purificada (é utilizado um enxaguamento tampão para amostras com proteínas que precipitam em água purificada). Se for utilizado um enxaguamento de tampão, deve ser seguido de enxaguar com água purificada.
- Enxaguar várias vezes com acetona ou etanol e, em seguida, secar bem com ar comprimido limpo ou azoto.
Nota:
Você também pode usar uma anilha de cuvette para isso se você tiver uma. Não recomendo centrifugadoras de cuvette para secar.
É particularmente importante que a cuvette esteja completamente seca antes do próximo passo. Se não for, o calor da mistura de ácido com água ou etanol pode danificar a cuveta! Continue com os passos de cuvette claro ou antirreflexo preto abaixo.
Cuvettes claras (sem revestimento preto por fora)
- Mergulhe em ácido nítrico concentrado, certificando-se de que o ar da cuvette está totalmente deslocado com o ácido.
Atenção:
Certifique-se de que o recipiente que contém o ácido está claramente marcado com o seu conteúdo e que está guardado num local seguro. Certifique-se de que a cuvette não fica danificada enquanto desloca a embarcação.
- Deixe a cuvette de molho durante 10 minutos a 30 min (ou durante a noite com ácido nítrico de 2 M ou se utilizar Nano-Strip de molho 30 min).
- Sobre uma bandeja de gotejamento, retire cuidadosamente a cuvette do ácido com pinças de aço inoxidável, agarrando a cuvette ligeiramente pelo pescoço, e não pelas superfícies óticas.
- Utilizando uma pipeta de transferência descartável de ponta fina ou pontas de carregamento de gel, retire cuidadosamente o máximo de ácido possível da cuvette. (Mais uma vez, a nano-tira não é compatível com pipetas plásticas)
- Enxaguar cuidadosamente a cuvette com água purificada várias vezes.
- Após pelo menos 7 enxaguamentos, meça um espectro de fluorescência da cuvette cheia de água para provar que está limpa utilizando os parâmetros que utilizaria para medir a amostra de onde provêm as contaminações.
- Enxagúe a cuvette limpa com acetona ou etanol e seque-a.
- Limpe o exterior da cuvette limpando suavemente com papel de limpeza de lentes humedelado com acetona ou etanol. Verifique se a cuvette está limpa segurando-a até à luz. Não deve haver contaminação visível ou manchas.
- Se não for necessário imediatamente, guarde a cuvette num ambiente limpo e seco.
Cuvette com revestimento antirreflexo preto no exterior
Não mergulhe cuvetas revestidas em ácido nítrico. Ácidos fortes (e certos solventes) degradam o revestimento.
- Encha a cuvette com ácido, certificando-se de que não pinga nenhuma na superfície exterior com uma pipeta de transferência ou uma ponta de pipeta. Evite agulhas de seringa metálica ou vidro, uma vez que podem riscar a cuvette.
- Certifique-se de que o ar da cuvette está totalmente deslocado com o ácido.
Atenção:
Certifique-se de que o recipiente que contém o ácido está claramente marcado com o seu conteúdo e que está guardado num local seguro. Certifique-se de que a cuvette não fica danificada enquanto desloca a embarcação.
- Deixe de molho durante 10 minutos a 30 min (ou durante a noite com ácido nítrico de 2 M), (com Nano-Strip 30 min deve ser suficiente).
- Utilizando uma pipeta de transferência descartável de ponta fina ou pontas de carregamento de gel, retire cuidadosamente o máximo de ácido possível da cuvette. (Mais uma vez, a nano-tira não é compatível com pipetas plásticas)
- Enxaguar cuidadosamente a cuvette com água purificada várias vezes.
- Após pelo menos 7 enxaguamentos, meça um espectro de fluorescência da cuvette cheia de água para provar que está limpa utilizando os parâmetros que utilizaria para medir a amostra de onde provêm as contaminações.
- Enxagúe a cuvette limpa com acetona ou etanol e seque-a.
- Limpe suavemente o exterior da cuvette com acetona ou etanol utilizando um tecido sem pelos macios. Verifique se a cuvette está limpa segurando-a até à luz. Não deve haver contaminação visível ou manchas.
- Se não for necessário imediatamente, guarde a cuvette num ambiente limpo e seco.
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