Hvordan overvinder man interferenser i UV – Synlige spektroskopiske undersøgelser?
Ideelt set bør absorbansspektret for en opløsning indeholdende en enkelt analyt være et enkelt absorptionsbånd ved bølgelængden af maksimal absorbans. I virkelige prøver bliver spektret imidlertid påvirket af tilstedeværelsen af andre interfererende arter. Sådanne interferenser kan let elimineres ved at anvende forskellige tilgange, der er beskrevet i artiklen.
Interferenser i UV-Synlig spektroskopi skyldes flere faktorer, som kan være både fysiske eller kemiske. Kemiske interferenser skyldes tilstedeværelsen af en enkelt eller gruppe af forbindelser, der absorberer i umiddelbar nærhed af det primære absorberende molekyle. På den anden side opstår fysiske interferenser generelt fra suspenderede faste urenheder i prøven, som kan føre til spredning.
Fysiske forstyrrelser
Spredning af lys er forårsaget af tilstedeværelsen af suspenderede urenheder i den absorberende opløsning. Det resulterer i en baggrundsabsorbans, som reducerer absorbansen af analytten af interesse. Filtrering eller centrifugering af prøver før udførelse af absorbansmålinger ser ud til at være den indlysende løsning, men dette er ikke en praktisk tilgang, når kun prøver i μl størrelse er tilgængelige. Tabet af absorbans på grund af spredning kan reduceres ved at reducere afstanden mellem prøven og detektoren.
Kemiske interferenser
Kemiske interferenser kan skyldes tilstedeværelsen af en enkelt eller en gruppe af absorberende enheder i den lysabsorberende opløsning.
Isoabsorbansmålinger
Hvis en interfererende forbindelse er til stede med kendte absorbansegenskaber, kan dens interferens med hovedanalytten elimineres ved at vælge en bølgelængde, hvor den interfererende forbindelse viser en vis absorbans, som den gør ved analytisk bølgelængde. Ved at trække absorbansen ved denne bølgelængde fra absorbansen ved analytisk bølgelængde restabsorbansen er den korrekte absorbans af analytten. Denne fremgangsmåde er praktisk, hvis kun en enkelt interferent er til stede, og hvis dens maksimale absorbansbølgelængde er langt væk fra analytens absorberende bølgelængde.
Multikomponent interferens
Multikomponentanalyse er anvendelig, når mere end én interferent er til stede, og der er betydelig spektral overlapning med hovedanalyttens spektre. Absorbansen af ren interferent trækkes fra den målte absorbans for at nå frem til den sande absorbans af analytten af interesse,
Trepunktskorrektion
I denne metode vælges to bølgelængder tæt på den analytiske bølgelængde, men på hver side af den. Interferensen af baggrunden kan estimeres nøjagtigt ved hjælp af lineær interpolation. Metoden er især anvendelig til ikke-lineære baggrundsabsorbanser som følge af komplekse prøvematricer.
Afledt spektroskopi
Langt den mest bekvemme tilgang til baggrunds- og støjkorrektion er afledt spektroskopi. Bøjningspunktet for den første afledte svarer til bølgelængden af maksimal absorbans, og den anden afledte fremstår som spidsen af den negativt formede top. Dette hjælper med at skelne mellem meget tæt anbragte eller overlappende absorbanstoppe. Det første derivat eliminerer yderligere baseline-forskydninger, hvis nogen, og dette hjælper med at forbedre nøjagtigheden af kvantitativ analyse. Ud over baseline-forskydning hjælper derivatspektroskopi også med at overvinde virkningerne af spredning fra andre uidentificerede interfererende forbindelser.
Recent Comments