Jak pokonać interferencje w UV – badania spektroskopii widzialnej?
Idealnie widmo absorbancji roztworu zawierającego pojedynczy analit powinno być pojedynczym pasmem absorpcyjnym przy długości fali maksymalnej absorbancji. Jednak w rzeczywistych próbkach na widmo wpływa obecność innych przeszkadzających gatunków. Takie zakłócenia można łatwo wyeliminować, stosując różne podejścia opisane w artykule.
Zakłócenia w spektroskopii UV-widzialnej wynikają z kilku czynników, które mogą mieć charakter zarówno fizyczny, jak i chemiczny. Zakłócenia chemiczne wynikają z obecności pojedynczych lub grup związków, które absorbują w bliskim sąsiedztwie pierwotnej cząsteczki absorbującej. Z drugiej strony zakłócenia fizyczne na ogół wynikają z zawieszonych w próbce zanieczyszczeń stałych, co może prowadzić do rozpraszania.
Zakłócenia fizyczne
Rozpraszanie światła jest spowodowane obecnością zawieszonych zanieczyszczeń w roztworze absorbującym. Powoduje to absorbancję tła, która zmniejsza absorbancję badanego analitu. Filtrowanie lub wirowanie próbek przed wykonaniem pomiarów absorbancji wydaje się oczywistym rozwiązaniem, ale nie jest to praktyczne podejście, gdy dostępne są tylko próbki o wielkości μl. Utrata absorbancji spowodowana rozpraszaniem może być zmniejszona poprzez zmniejszenie odstępu między próbką a detektorem.
Zakłócenia chemiczne
Zakłócenia chemiczne mogą wynikać z obecności jednej lub grupy jednostek absorbujących w roztworze absorbującym światło.
Pomiary izoabsorpcji
W przypadku obecności związku zakłócającego o znanej charakterystyce absorbancji, jego interferencję z głównym analitem można wyeliminować, wybierając długość fali, w której związek zakłócający wykazuje pewną absorbancję, tak jak ma to miejsce przy analitycznej długości fali. Po odjęciu absorbancji przy tej długości fali od absorbancji przy analityczna długość fali absorbancja resztkowa jest prawidłową absorbancją analitu. To podejście jest praktyczne, jeśli obecny jest tylko jeden interferent i jeśli jego maksymalna absorbancja długości fali jest daleko od długości fali absorbującej analitu.
Zakłócenia wieloskładnikowe
Analiza wieloskładnikowa ma zastosowanie, gdy występuje więcej niż jeden interferent i występuje znaczne nakładanie się widm z widmami głównego analitu. Absorbancja czystego czynnika zakłócającego jest odejmowana od zmierzonej absorbancji w celu uzyskania rzeczywistej absorbancji analitu będącego przedmiotem zainteresowania,
Korekcja trzypunktowa
W tej metodzie dwie długości fali są wybierane w pobliżu długości fali analitycznej, ale po obu jej stronach. Interferencję tła można dokładnie oszacować za pomocą interpolacji liniowej. Metoda ma zastosowanie zwłaszcza w przypadku nieliniowych absorbancji tła wynikających ze złożonych matryc próbek.
Spektroskopia pochodna
Zdecydowanie najwygodniejszym podejściem do korekcji tła i szumu jest spektroskopia pochodna. Punkt przegięcia pierwszej pochodnej odpowiada długości fali maksymalnej absorbancji, a druga pochodna pojawia się jako wierzchołek ujemnie ukształtowanego piku. Pomaga to w rozróżnieniu między bardzo blisko rozmieszczonymi lub nakładającymi się pikami absorbancji. Pierwsza pochodna dodatkowo eliminuje ewentualne przesunięcia linii bazowej, co pomaga poprawić dokładność analizy ilościowej. Oprócz przesunięcia linii bazowej spektroskopia pochodnych pomaga również przezwyciężyć skutki rozpraszania od innych niezidentyfikowanych związków zakłócających.
Recent Comments