Come superare le interferenze negli studi spettroscopici UV – Visible?
Idealmente, lo spettro di assorbanza di una soluzione contenente un singolo analita dovrebbe essere una singola banda di assorbimento alla lunghezza d’onda di massima assorbanza. Tuttavia, nei campioni reali lo spettro viene influenzato dalla presenza di altre specie interferenti. Tali interferenze possono essere facilmente eliminate adottando diversi approcci contemplati nell’articolo.
Le interferenze nella spettroscopia UV-Visibile derivano da diversi fattori che possono essere di natura sia fisica che chimica. Le interferenze chimiche derivano dalla presenza di qualsiasi singolo o gruppo di composti che assorbono in prossimità della molecola di assorbimento primaria. D’altra parte, le interferenze fisiche derivano generalmente da impurità solide sospese nel campione che possono portare alla dispersione.
Interferenze fisiche
La dispersione della luce è causata dalla presenza di impurità sospese nella soluzione assorbente. Ne risulta un’assorbanza di fondo che riduce l’assorbanza dell’analita di interesse. Il filtraggio o la centrifugazione dei campioni prima di effettuare le misurazioni dell’assorbanza sembra essere la soluzione ovvia, ma questo non è un approccio pratico quando sono disponibili solo campioni di dimensioni μl. La perdita di assorbanza dovuta alla dispersione può essere ridotta riducendo lo spazio tra il campione e il rivelatore.
Interferenze chimiche
Le interferenze chimiche possono derivare dalla presenza di una singola o di un gruppo di entità assorbenti nella soluzione che assorbe la luce.
Misure di isoassorbimento
Nel caso in cui sia presente un composto interferente con caratteristiche di assorbimento note, la sua interferenza con l’analita principale può essere eliminata selezionando una lunghezza d’onda in cui il composto interferente mostra una certa assorbanza come fa alla lunghezza d’onda analitica. Sottraendo l’assorbanza a questa lunghezza d’onda dall’assorbanza a lunghezza d’onda analitica l’assorbanza residua è l’assorbanza corretta dell’analita. Questo approccio è pratico se è presente solo un singolo interferente e se la sua lunghezza d’onda di assorbimento massima è molto lontana dalla lunghezza d’onda di assorbimento dell’analita.
Interferenza multicomponente
L’analisi multicomponente è applicabile quando è presente più di un interferente e vi è una notevole sovrapposizione spettrale con gli spettri dell’analita principale. L’assorbanza dell’interferente puro viene sottratta dall’assorbanza misurata per arrivare alla vera assorbanza dell’analita di interesse,
Correzione a tre punti
In questo metodo vengono selezionate due lunghezze d’onda vicine alla lunghezza d’onda analitica ma su entrambi i lati di essa. L’interferenza dello sfondo può essere stimata accuratamente utilizzando l’interpolazione lineare. Il metodo è applicabile in particolare per assorbanze di fondo non lineari risultanti da matrici di campioni complesse.
Spettroscopia derivativa
L’approccio di gran lunga più conveniente alla correzione del rumore e dello sfondo è la spettroscopia derivativa. Il punto di flessione della prima derivata corrisponde alla lunghezza d’onda di massima assorbanza e la seconda derivata appare come la punta del picco di forma negativa. Questo aiuta a distinguere tra picchi di assorbanza molto ravvicinati o sovrapposti. Il primo derivato elimina ulteriormente gli spostamenti della linea di base, se presenti, e questo aiuta a migliorare l’accuratezza dell’analisi quantitativa. Oltre allo spostamento della linea di base, la spettroscopia dei derivati aiuta anche a superare gli effetti della dispersione da altri composti interferenti non identificati.