Hur övervinner man störningar i UV – Synliga spektroskopiska studier?
Idealiskt bör absorbansspektrumet för en lösning innehållande en enda analyt vara ett enda absorptionsband vid våglängden för maximal absorbans. Men i verkliga prover påverkas spektrumet av närvaron av andra störande arter. Sådana störningar kan enkelt elimineras genom att använda olika tillvägagångssätt som behandlas i artikeln.
Interferenser i UV-Synlig spektroskopi beror på flera faktorer som kan vara både fysiska eller kemiska. Kemiska störningar härrör från närvaron av någon enstaka eller grupp av föreningar som absorberar i omedelbar närhet av den primära absorberande molekylen. Å andra sidan uppstår fysiska störningar i allmänhet från suspenderade fasta föroreningar i provet som kan leda till spridning.
Fysiska störningar
Spridning av ljus orsakas av närvaron av suspenderade föroreningar i den absorberande lösningen. Det resulterar i en bakgrundsabsorbans som minskar absorbansen av analyten av intresse. Filtrering eller centrifugering av prover innan absorbansmätningar tycks vara den självklara lösningen men detta är inte ett praktiskt tillvägagångssätt när endast μl-prover är tillgängliga. Förlusten av absorbans på grund av spridning kan minskas genom att minska gapet mellan provet och detektorn.
Kemiska störningar
Kemiska störningar kan vara resultatet av närvaron av en enda eller en grupp av absorberande enheter i den ljusabsorberande lösningen.
Isoabsorbansmätningar
Om en störande förening är närvarande med kända absorbansegenskaper kan dess interferens med huvudanalyten elimineras genom att välja en våglängd där den störande föreningen visar viss absorbans som den gör vid analytisk våglängd. När absorbansen vid denna våglängd subtraheras från absorbansen vid analytisk våglängd restabsorbansen är analytens korrekta absorbans. Detta tillvägagångssätt är praktiskt om endast en enda interferent är närvarande och om dess maximala absorbansvåglängd är långt borta från analytens absorberande våglängd.
Flerkomponentstörningar
Multikomponentanalys är tillämplig när mer än en interferent är närvarande och det finns en betydande spektral överlappning med huvudanalytens spektra. Absorbansen av ren interferent subtraheras från den uppmätta absorbansen för att komma fram till den verkliga absorbansen av analyten av intresse,
Trepunktskorrigering
I denna metod väljs två våglängder nära den analytiska våglängden men på vardera sidan om den. Interferensen av bakgrunden kan uppskattas exakt med hjälp av linjär interpolation. Metoden är särskilt tillämpbar för icke-linjära bakgrundsabsorbanser som härrör från komplexa provmatriser.
Derivatspektroskopi
Den överlägset mest bekväma metoden för bakgrunds- och bruskorrigering är derivatspektroskopi. Böjningspunkten för den första derivatan motsvarar våglängden för maximal absorbans och den andra derivatan framträder som spetsen på den negativt formade toppen. Detta hjälper till att skilja mellan mycket tätt placerade eller överlappande absorbanstoppar. Den första derivatan eliminerar ytterligare baslinjeförskjutningar, om några, och detta hjälper till att förbättra noggrannheten i kvantitativ analys. Förutom baslinjeförskjutning hjälper derivatspektroskopi också att övervinna effekterna av spridning från andra oidentifierade störande föreningar.