{"id":69013,"date":"2022-02-21T12:52:12","date_gmt":"2022-02-21T04:52:12","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/absorbansmatningar-det-snabba-sattet-att-bestamma-provkoncentrationen-2\/"},"modified":"2022-02-21T12:52:59","modified_gmt":"2022-02-21T04:52:59","slug":"absorbansmatningar-det-snabba-sattet-att-bestamma-provkoncentrationen-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/absorbansmatningar-det-snabba-sattet-att-bestamma-provkoncentrationen-2\/","title":{"rendered":"Absorbansm\u00e4tningar \u2013 det snabba s\u00e4ttet att best\u00e4mma provkoncentrationen"},"content":{"rendered":"\n

Inom molekyl\u00e4ra och biokemiska till\u00e4mpningar, s\u00e5v\u00e4l som inom medicinsk diagnostik, \u00e4r best\u00e4mning av koncentrationerna av \u00e4mnen i l\u00f6sning ett avg\u00f6rande analyssteg. Ofta anv\u00e4nds fotometriska metoder f\u00f6r detta \u00e4ndam\u00e5l, eftersom dessa kan utf\u00f6ras enkelt och snabbt, och eftersom de ofta representerar det mest kostnadseffektiva alternativet.<\/p>\n\n

I allm\u00e4nhet bygger (spektro)fotometriska metoder p\u00e5 principen att molekyler i l\u00f6sning absorberar ljus, och att det d\u00e4rmed f\u00f6rsvagade ljuset m\u00e4ts med hj\u00e4lp av en detektor. Som antyds i namnet anv\u00e4nder UV\/Vis-spektrofotometrar synligt och ultraviolett ljus i v\u00e5gl\u00e4ngdsintervallet mellan cirka 200 och 900 nm.<\/p>\n\n

F\u00f6r att best\u00e4mma koncentrationen av en analyt anv\u00e4nds oftast den v\u00e5gl\u00e4ngd vid vilken molekylen uppvisar den h\u00f6gsta absorbansen (toppv\u00e5gl\u00e4ngden). I fallet med nukleinsyror och proteiner, till exempel, skulle detta vara 260 nm respektive 280 nm. Fysikens lagar som beskrivs av Lambert-Beers lag utg\u00f6r grunden f\u00f6r ber\u00e4kningen av koncentrationen av ett \u00e4mne fr\u00e5n fotometriska m\u00e4tningar. Detta sker enligt stegen i formlerna nedan:<\/p>\n\n

  1. \u00d6verf\u00f6ring eller \u00f6verf\u00f6ring (T) = I\/I 0<\/sub>Transmissionen best\u00e4ms i en fotometer, med hj\u00e4lp av f\u00f6rh\u00e5llandet mellan ljuset som kommer ut och ljuset som kommer in i provet.<\/li>
  2. Absorbans (A) = log (I 0<\/sub> \/I)Absorbansen ber\u00e4knas fr\u00e5n den negativa dekadiska logaritmen f\u00f6r transmission.<\/li>
  3. Absorbans (A) = C x L x \u0190 => Koncentration (C) = A\/(L x \u0190)Lambert-Beer-lagen beskriver absorbansens beroende av koncentrationen av provet (C), den optiska v\u00e4gl\u00e4ngden (L) samt beroendet av en provspecifik extinktionskoefficient (\u0190), som h\u00e4nf\u00f6r sig till ett specifikt \u00e4mne vid en specifik v\u00e5gl\u00e4ngd. Provkoncentrationen ber\u00e4knas sedan genom att konvertera formeln.<\/li><\/ol>\n

    Dessa tre uttalanden beskrivs mer i detalj nedan.Best\u00e4mning av \u00f6verf\u00f6ring (T = I\/I 0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    Figur 1: F\u00f6renklad montering av en fotometer som visar provet och parametrar som \u00e4r relevanta f\u00f6r lagen om Lambert-Beer<\/p>\n\n

    I 0<\/sub> : Ljus som kommer in i provetI: Ljus som l\u00e4mnar provetC: Koncentration av provetL: Ljusv\u00e4g\/tjocklek p\u00e5 provet\u0190: Extinktionskoefficient<\/em><\/p>\n\n

    I grund och botten best\u00e5r en fotometer av en ljusk\u00e4lla, en position som h\u00e5ller provet och en detektor (figur 1). Detektorn m\u00e4ter intensiteten av ljuset som f\u00e4rdas genom provet. Naturligtvis finns ett antal andra komponenter n\u00e4rvarande; specifikt optiska element som bryter ljuset och separerar det i individuella v\u00e5gl\u00e4ngder s\u00e5v\u00e4l som element som reflekterar eller transmitterar ljuset.<\/p>\n\n

    En fotometers ljusk\u00e4lla avger ljus med en definierad intensitet I 0<\/sub> , som leds genom provl\u00f6sningen. En del av ljuset kommer att absorberas av provet. Den del som passerar provet registreras av detektorn som intensitet I. F\u00f6rh\u00e5llandet I\/I 0<\/sub> beskriver \u00f6verf\u00f6ringen av provet vid en definierad v\u00e5gl\u00e4ngd.<\/p>\n\n

    Ber\u00e4kning av absorbans (A = log (I 0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n

    Moderna fotometrar omvandlar automatiskt \u00f6verf\u00f6ringen av ett prov till absorbans, vilket definieras som den negativa dekadiska logaritmen f\u00f6r \u00f6verf\u00f6ringen. Fr\u00e5gan uppst\u00e5r varf\u00f6r transmission inte direkt anv\u00e4nds f\u00f6r ber\u00e4kning av provkoncentration. Figur 2 klarg\u00f6r sambandet mellan transmission och absorbans. Om flera prover, som var och en till\u00e5ter 50 % av ljuset som kommer in i provet att passera, kopplas i serie, kommer den exponentiellt minskande transmissionskurvan, som visas nedan, att resultera. Om v\u00e4rdena ist\u00e4llet uttrycks p\u00e5 ett logaritmiskt s\u00e4tt, uppst\u00e5r ett linj\u00e4rt beroende. P\u00e5 s\u00e5 s\u00e4tt \u00e4r absorbansen proportionell mot koncentrationen (liksom v\u00e4gl\u00e4ngden), vilket f\u00f6renklar ber\u00e4kningarna avsev\u00e4rt.<\/p>\n\n

    Figur 2: Sambandet mellan transmission och absorbans av ljus:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    a) Ansluta prover i serie, som vart och ett till\u00e5ter \u00f6verf\u00f6ring av 50 % av ljuset som kommer in i provet. Procentandelen avser den initiala ljusintensiteten.<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    b) Exponentiellt fallande transmissionskurva<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    c) Grafisk representation av absorbansen (med anv\u00e4ndning av den dekadiska logaritmen f\u00f6r transmission)<\/p>\n\n

    Ber\u00e4kning av koncentration (C = A\/(L x \u0190))<\/u><\/strong>F\u00f6r att h\u00e4rleda koncentrationen av ett prov fr\u00e5n dess absorbans kr\u00e4vs ytterligare information. Lambert-Beer-lagen, som utg\u00f6r den fysiska grunden f\u00f6r fotometriska till\u00e4mpningar, beskriver att absorptionen av ljus av ett prov \u00e4r direkt proportionell mot dess koncentration och dess v\u00e4gl\u00e4ngd. Sammantaget bidrar tre parametrar till absorbansv\u00e4rdet f\u00f6r ett prov: f\u00f6r det f\u00f6rsta, koncentrationen (C) av molekylen; f\u00f6r det andra provets banl\u00e4ngd (L), som i allm\u00e4nhet \u00e4r lika med kyvettens banl\u00e4ngd. Sedan finns det extinktionskoefficienten (\u0190). Extinktionskoefficienten \u00e4r en fysisk konstant som \u00e4r unik f\u00f6r molekylen; den beskriver dess egenskap att absorbera ljus vid en specifik v\u00e5gl\u00e4ngd. Denna materialspecifika konstant \u00e4r k\u00e4nd f\u00f6r ett antal \u00e4mnen, inklusive nukleinsyror och olika proteiner, och v\u00e4rdena har publicerats i relevant litteratur. I dessa fall kan koncentrationen best\u00e4mmas omedelbart. Om v\u00e4rdet inte \u00e4r k\u00e4nt \u00e4r det dock m\u00f6jligt att ta hj\u00e4lp av en kalibreringskurva. F\u00f6r att generera en kalibreringskurva kr\u00e4vs standarder, det vill s\u00e4ga l\u00f6sningar som inneh\u00e5ller k\u00e4nda koncentrationer av de \u00e4mnen som ska analyseras. Dessa m\u00e4ts i fotometern f\u00f6re sj\u00e4lva provet. Koncentrationen av analyten ber\u00e4knas sedan med anv\u00e4ndning av standardkurvan.<\/p>\n\n

    Ut\u00f6ver kvantifiering kan absorbansm\u00e4tningar ocks\u00e5 avsl\u00f6ja kvalitativ information om provet: till exempel kan renheten hos nukleinsyror och proteiner best\u00e4mmas genom att uts\u00e4tta provet f\u00f6r m\u00e4tningar vid ytterligare v\u00e5gl\u00e4ngder, medan information om enzymaktivitet vanligtvis erh\u00e5lls genom upprepade m\u00e4tningar \u00f6ver tid.<\/p>\n\n

    K\u00e4lla<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    Inom molekyl\u00e4ra och biokemiska till\u00e4mpningar, s\u00e5v\u00e4l som inom medicinsk diagnostik, \u00e4r best\u00e4mning av koncentrationerna av \u00e4mnen i l\u00f6sning ett avg\u00f6rande analyssteg. Ofta anv\u00e4nds fotometriska metoder f\u00f6r detta \u00e4ndam\u00e5l, eftersom dessa kan utf\u00f6ras enkelt och snabbt, och eftersom de ofta representerar det mest kostnadseffektiva alternativet. I allm\u00e4nhet bygger (spektro)fotometriska metoder p\u00e5 principen att molekyler i l\u00f6sning<\/p>\n

    Read More<\/a><\/div>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_uag_custom_page_level_css":"","ub_ctt_via":"","footnotes":""},"categories":[822,817],"tags":[],"class_list":["post-69013","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-alla-inlagg","category-spektrofotometri"],"featured_image_src":null,"author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/author\/admin\/"},"uagb_featured_image_src":{"full":false,"thumbnail":false,"medium":false,"medium_large":false,"large":false,"1536x1536":false,"2048x2048":false,"bacola-woo-product":false,"woocommerce_thumbnail":false,"woocommerce_single":false,"woocommerce_gallery_thumbnail":false,"variation_swatches_image_size":false,"variation_swatches_tooltip_size":false,"dgwt-wcas-product-suggestion":false},"uagb_author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/author\/admin\/"},"uagb_comment_info":0,"uagb_excerpt":"Inom molekyl\u00e4ra och biokemiska till\u00e4mpningar, s\u00e5v\u00e4l som inom medicinsk diagnostik, \u00e4r best\u00e4mning av koncentrationerna av \u00e4mnen i l\u00f6sning ett avg\u00f6rande analyssteg. Ofta anv\u00e4nds fotometriska metoder f\u00f6r detta \u00e4ndam\u00e5l, eftersom dessa kan utf\u00f6ras enkelt och snabbt, och eftersom de ofta representerar det mest kostnadseffektiva alternativet. I allm\u00e4nhet bygger (spektro)fotometriska metoder p\u00e5 principen att molekyler i l\u00f6sningRead…","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69013","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=69013"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69013\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":69016,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69013\/revisions\/69016"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=69013"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=69013"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/sv\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=69013"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}