{"id":68365,"date":"2022-02-21T11:21:51","date_gmt":"2022-02-21T03:21:51","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/medicoes-de-absorcao-a-forma-rapida-de-determinar-a-concentracao-da-amostra\/"},"modified":"2022-02-21T11:22:51","modified_gmt":"2022-02-21T03:22:51","slug":"medicoes-de-absorcao-a-forma-rapida-de-determinar-a-concentracao-da-amostra","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/pt-pt\/medicoes-de-absorcao-a-forma-rapida-de-determinar-a-concentracao-da-amostra\/","title":{"rendered":"Medi\u00e7\u00f5es de Absor\u00e7\u00e3o \u2013 a forma r\u00e1pida de determinar a concentra\u00e7\u00e3o da amostra"},"content":{"rendered":"\n

No \u00e2mbito das aplica\u00e7\u00f5es moleculares e bioqu\u00edmicas, bem como nos diagn\u00f3sticos m\u00e9dicos, a determina\u00e7\u00e3o das concentra\u00e7\u00f5es de subst\u00e2ncias em solu\u00e7\u00e3o \u00e9 um passo de an\u00e1lise crucial. Frequentemente, os m\u00e9todos fotom\u00e9tricos s\u00e3o utilizados para este fim, uma vez que estes podem ser conduzidos de forma f\u00e1cil e r\u00e1pida, e porque muitas vezes representam a op\u00e7\u00e3o mais rent\u00e1vel.<\/strong><\/p>\n\n

Em geral, os m\u00e9todos fotom\u00e9tricos (espectro)baseiam-se no princ\u00edpio de que as mol\u00e9culas em solu\u00e7\u00e3o absorvem a luz, e que a luz assim enfraquecida \u00e9 medida com a ajuda de um detetor. Tal como impl\u00edcito no nome, os espectrofot\u00f3metros UV\/Vis utilizam a luz vis\u00edvel e ultravioleta na faixa de comprimento de onda entre aproximadamente 200 e 900 nm.<\/p>\n\n

Para determinar a concentra\u00e7\u00e3o de um anal\u00edtico, na maioria das vezes o comprimento de onda \u00e9 utilizado no qual a mol\u00e9cula apresenta a maior absorv\u00e2ncia (comprimento de onda de pico). No caso dos \u00e1cidos nucleicos e das prote\u00ednas, por exemplo, seriam 260 nm e 280 nm, respectivamente. As leis da f\u00edsica descritas pela lei Lambert-Beer formam a base para o c\u00e1lculo da concentra\u00e7\u00e3o de uma subst\u00e2ncia a partir de medi\u00e7\u00f5es fotom\u00e9tricas. Isto ocorre de acordo com os passos das f\u00f3rmulas abaixo enumeradas:<\/p>\n\n

  1. Transmiss\u00e3o ou transmiss\u00e3o (T) = I\/I0<\/sub>A transmiss\u00e3o \u00e9 determinada num fotometro, utilizando a rela\u00e7\u00e3o entre a luz que sai e a luz que entra na amostra.<\/li>
  2. Absorv\u00e2ncia (A) = log (I0<\/sub>\/I)A absorv\u00e2ncia \u00e9 calculada a partir do logaritmo descadico negativo da transmiss\u00e3o.<\/li>
  3. Absorv\u00e2ncia (A) = C x L x \u0190 => Concentra\u00e7\u00e3o (C) = A\/(L x \u0190)A lei Lambert-Beer descreve a depend\u00eancia da absorv\u00e2ncia na concentra\u00e7\u00e3o da amostra (C), o comprimento do percurso \u00f3tico (L) bem como a depend\u00eancia de um coeficiente de extin\u00e7\u00e3o espec\u00edfico da amostra (\u0190), que diz respeito a uma subst\u00e2ncia espec\u00edfica num comprimento de onda espec\u00edfico. A concentra\u00e7\u00e3o da amostra \u00e9 ent\u00e3o calculada atrav\u00e9s da convers\u00e3o da f\u00f3rmula.<\/li><\/ol>\n

    Estas tr\u00eas declara\u00e7\u00f5es s\u00e3o descritas mais detalhadamente abaixo.<\/p>\n\n

    Determina\u00e7\u00e3o da transmiss\u00e3o (T = I\/I0<\/sub>)<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a>
    Figura 1: Montagem simplificada de um fotometro que retrata a amostra e os par\u00e2metros relevantes para a lei da Lambert-Beer<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n

    I0<\/sub>: Luz que entra na amostraI: Luz que sai da amostraC: Concentra\u00e7\u00e3o da amostraL: Caminho leve\/espessura da amostra\u0190: Coeficiente de extin\u00e7\u00e3o<\/em><\/p>\n\n

    Basicamente, um fotometro consiste numa fonte de luz, uma posi\u00e7\u00e3o que cont\u00e9m a amostra, e um detetor (figura 1). O detetor mede a intensidade da luz que viaja atrav\u00e9s da amostra. Naturalmente, est\u00e3o presentes v\u00e1rios outros componentes; especificamente, elementos \u00f3ticos que refratam a luz e a separam em comprimentos de onda individuais, bem como elementos que refletem ou transmitem a luz.<\/p>\n\n

    A fonte luminosa de um fotometro emite luz numa intensidade definida I0<\/sub>, que \u00e9 guiada atrav\u00e9s da solu\u00e7\u00e3o da amostra. Uma parte da luz ser\u00e1 absorvida pela amostra. A parte que atravessa a amostra \u00e9 registada pelo detetor como intensidade I. A raz\u00e3o I\/I0<\/sub> descreve a transmiss\u00e3o da amostra num comprimento de onda definido.<\/p>\n\n

    C\u00e1lculo da absorv\u00e2ncia (A = log (I0<\/sub>\/I)<\/strong><\/p>\n\n

    Os fotometros modernos convertem automaticamente a transmiss\u00e3o de uma amostra em absorv\u00e2ncia, que \u00e9 definida como o logaritmo decat\u00f3lico negativo da transmiss\u00e3o. Coloca-se a quest\u00e3o de saber por que raz\u00e3o a transmiss\u00e3o n\u00e3o \u00e9 diretamente utilizada para o c\u00e1lculo da concentra\u00e7\u00e3o da amostra. A figura 2 esclarece a liga\u00e7\u00e3o entre a transmiss\u00e3o e a absorv\u00e2ncia. Se v\u00e1rias amostras, que cada uma permite que 50 % da luz que entra na amostra para atravessar, forem ligadas em s\u00e9rie, a curva de transmiss\u00e3o exponencialmente em decl\u00ednio, descrita abaixo, resultar\u00e1. Se os valores forem expressos de forma logar\u00edtmica, resultar\u00e1 uma depend\u00eancia linear. Desta forma, a absorv\u00e2ncia \u00e9 proporcional \u00e0 concentra\u00e7\u00e3o (bem como ao comprimento do percurso), o que simplifica consideravelmente os c\u00e1lculos.<\/p>\n\n

    Figura 2: A liga\u00e7\u00e3o entre a transmiss\u00e3o e a absorv\u00e2ncia da luz:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a>
    a) As amostras de liga\u00e7\u00e3o em s\u00e9rie, cada uma das quais permitem a transmiss\u00e3o de 50 % da luz que entra na amostra. A percentagem diz respeito \u00e0 intensidade inicial da luz.<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n
    \"\"<\/a>
    b) Curva de transmiss\u00e3o exponencialmente em decl\u00ednio<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n
    \"\"<\/a>
    c) Representa\u00e7\u00e3o gr\u00e1fica da absorv\u00e2ncia (utilizando o logaritmo decat\u00f3ico da transmiss\u00e3o)<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n

    C\u00e1lculo da concentra\u00e7\u00e3o (C = A\/L x \u0190))<\/strong><\/p>\n\n

    Para obter a concentra\u00e7\u00e3o de uma amostra da sua absorv\u00e2ncia, s\u00e3o necess\u00e1rias informa\u00e7\u00f5es adicionais. A lei Lambert-Beer, que constitui a base f\u00edsica para aplica\u00e7\u00f5es fotom\u00e9tricas, descreve que a absor\u00e7\u00e3o da luz por uma amostra \u00e9 diretamente proporcional \u00e0 sua concentra\u00e7\u00e3o e ao seu comprimento de percurso. Ao todo, tr\u00eas par\u00e2metros contribuem para o valor de absorv\u00e2ncia de uma amostra: primeiro, a concentra\u00e7\u00e3o (C) da mol\u00e9cula; em segundo lugar, o comprimento do caminho (L) da amostra, que geralmente \u00e9 igual ao comprimento do caminho da cuvette. Depois h\u00e1 o coeficiente de extin\u00e7\u00e3o (\u0190). O coeficiente de extin\u00e7\u00e3o \u00e9 uma constante f\u00edsica \u00fanica \u00e0 mol\u00e9cula; descreve a sua propriedade de absorver a luz num comprimento de onda espec\u00edfico. Esta constante espec\u00edfica do material \u00e9 conhecida por uma s\u00e9rie de subst\u00e2ncias, incluindo \u00e1cidos nucleicos e v\u00e1rias prote\u00ednas, e os valores foram publicados na literatura pertinente. Nestes casos, a concentra\u00e7\u00e3o pode ser determinada instantaneamente. No entanto, se o valor n\u00e3o for conhecido, \u00e9 poss\u00edvel recorrer \u00e0 ajuda de uma curva de calibra\u00e7\u00e3o. Para gerar uma curva de calibra\u00e7\u00e3o, s\u00e3o necess\u00e1rias normas, ou seja, solu\u00e7\u00f5es que contenham concentra\u00e7\u00f5es conhecidas das subst\u00e2ncias a analisar. Estes s\u00e3o medidos no fotometro antes da amostra real. A concentra\u00e7\u00e3o da subst\u00e2ncia a analisar \u00e9 ent\u00e3o calculada utilizando a curva padr\u00e3o.<\/p>\n\n

    Na al\u00e9m da quantifica\u00e7\u00e3o, as medi\u00e7\u00f5es de absorv\u00e2ncia podem igualmente revelar informa\u00e7\u00f5es qualitativas sobre a amostra: por exemplo, a pureza dos \u00e1cidos e prote\u00ednas nucleicos pode ser determinada submetendo a amostra a medi\u00e7\u00f5es a comprimentos de onda adicionais, enquanto a informa\u00e7\u00e3o sobre a atividade enzim\u00e1tica \u00e9 geralmente obtida atrav\u00e9s de medi\u00e7\u00f5es repetidas ao longo do tempo.<\/p>\n\n

    Fonte<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    No \u00e2mbito das aplica\u00e7\u00f5es moleculares e bioqu\u00edmicas, bem como nos diagn\u00f3sticos m\u00e9dicos, a determina\u00e7\u00e3o das concentra\u00e7\u00f5es de subst\u00e2ncias em solu\u00e7\u00e3o \u00e9 um passo de an\u00e1lise crucial. Frequentemente, os m\u00e9todos fotom\u00e9tricos s\u00e3o utilizados para este fim, uma vez que estes podem ser conduzidos de forma f\u00e1cil e r\u00e1pida, e porque muitas vezes representam a op\u00e7\u00e3o mais<\/p>\n

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