Para efeitos de análises fotométricas de amostras líquidas, a solução deve ser colocada no caminho luminoso de um fotometro num formato definido. Cuvettes, ou seja, recipientes de amostra com janelas óticas, são a escolha padrão para esta aplicação.

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Para efeitos de análises fotométricas de amostras líquidas, a solução deve ser colocada no caminho luminoso de um fotometro num formato definido. Cuvettes, ou seja, recipientes de amostra com janelas óticas, são a escolha padrão para esta aplicação. A distância entre as janelas óticas é definida com precisão; desta forma, o comprimento do caminho da amostra dentro da cuvette é conhecido. A seleção de diferentes tipos de cuvettes é vasta – mesmo que apenas essas cuvetettes sejam consideradas que são usadas para medições de absorvância na área da espectroscopia UV-Vis. O tipo mais comum de cuveta é quadrado, com dimensões externas de 12,5 x 12,5 mm. Este formato acomoda volumes de amostra desde a gama de microlituos (ultra-micro cuvettes) até à gama de mililitros (macro cuvettes) (figura 1). O comprimento do caminho normal de uma cuvette mede 10 mm; no entanto, também estão disponíveis cuvettes que fornecem um caminho de luz mais curto através da amostra. Além disso, as cuvetas diferem em relação ao seu material, à sua altura e ao tamanho da sua janela de medição (figura 1).

Figura 1: Cuvetes que apresentam as dimensões exteriores padrão de 12,5 x 12,5 mm, mas que requerem diferentes volumes mínimos de amostra.

Consulte a nossa lista de Cuvettes de Quartz para a espectroscopia UV/Vis/IR

A decisão sobre que tipo de cuvette escolher dependerá do instrumento utilizado, da natureza da aplicação e das propriedades da amostra. É geralmente importante que as cuvetas sejam o mais transparentes possível para que os comprimentos de onda sejam medidos de modo a não limitar a gama linear disponível do fotometro.

A seleção do equipamento requer requisitos na cuvette, uma vez que deve ser compatível com o dispositivo. Isto diz principalmente respeito às dimensões exteriores da cuvette, pois precisa de caber no eixo da cuvette, mas a altura das janelas de medição também é crucial. Estes devem alinhar-se perfeitamente com o caminho luminoso que percorre o instrumento. Esta consideração é particularmente relevante para as cuvetes que são concebidas para medir pequenos volumes e que, portanto, apresentam janelas de medição muito pequenas. As alturas comuns dos caminhos de luz são de 8,5 mm e 15 mm.

O próximo aspeto importante diz respeito aos comprimentos de onda de medição que estão envolvidos na aplicação em questão. Os cuvetes standard fabricados a partir de PMMA, poliestireno ou vidro normal são apenas transparentes na gama visível. Se forem utilizados comprimentos de onda na gama UV, inferior a aproximadamente 300 nm, devem ser utilizados cuvetes feitos de vidro de quartzo ou um tipo especial de plástico, que proporcione transparência suficiente nesta gama (figura 2).

Figura 2: Diferenças entre os espectros de absorvância de cuvetes feitos a partir de diferentes materiais, medidos entre 220 nm e 400 nm

O aquecimento e o controlo eficiente da temperatura de uma amostra durante o processo de medição são cruciais para os métodos que dependem de reações que ocorrem a uma determinada temperatura específica e que medem a absorção ao longo do tempo. Para além de um nível adequado de resistência do material, é importante, neste caso, que a área de contacto entre a parede da cuvette e o eixo cuvette controlado pela temperatura seja o maior possível. Por estas razões, certos cuvetes, como macro-cuvettes, proporcionam uma vantagem em aplicações controladas pela temperatura.

Outros aspetos que influenciarão a escolha da cuvette incluem a natureza, o volume e a concentração da amostra em questão.
Se a amostra for baseada numa solução aquosa, o material a partir do qual a cuvette é feita é relativamente inconsequente. Se, por outro lado, os solventes orgânicos estiverem envolvidos, os cuvetes de vidro são a escolha preferida, uma vez que estes apresentam maior resistência em comparação com variantes feitas de plástico.

Se apenas houver uma pequena quantidade de amostra disponível, poderá considerar-se a reutilização da amostra para as seguintes medições. Neste caso, recomenda-se a utilização única de cuvettes de plástico. Cuvetes de plástico, se embalados individualmente e de uma qualidade de pureza adequada, minimizarão o risco de contaminação. Alternativamente, podem ser selecionadas cuvetes que foram concebidas para acomodar volumes extremamente pequenos.

A concentração de uma amostra também influenciará a escolha da cuvette, uma vez que cada instrumento tem um limite superior de deteção. Por exemplo, se utilizar um fotometro com uma gama linear de medição de até 2 A com um comprimento de caminho de 10 mm, o ADN de dois fios pode ser quantificado de forma fiável até uma concentração máxima de 100 μg/ml. As soluções de concentrações mais elevadas devem ser diluídas ou a diluição pode ser simulada com uma cuvette que apresenta um comprimento de caminho mais curto. De acordo com a lei Lambert-Beer, um comprimento de caminho de 1 mm permite assim a medição de concentrações de DSDNA até 1.000 μg/mL.

Se não for prescrito pela natureza da aplicação, o material da cuvette apresenta uma outra escolha a fazer. Em geral, as cuvetas de vidro apresentam maior transparência e precisão da medição, podendo ser reutilizadas muitas vezes. Por outro lado, o manuseamento de cuvetes de plástico é simples e seguro. Uma vez que as cuvetas de plástico só são utilizadas uma vez e não necessitam de limpeza, não é necessário ter em conta possíveis danos e perdas.

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