{"id":69019,"date":"2022-02-21T12:52:37","date_gmt":"2022-02-21T04:52:37","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/misurazioni-dellassorbanza-il-modo-rapido-per-determinare-la-concentrazione-del-campione-2\/"},"modified":"2022-02-21T12:53:07","modified_gmt":"2022-02-21T04:53:07","slug":"misurazioni-dellassorbanza-il-modo-rapido-per-determinare-la-concentrazione-del-campione-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/it\/misurazioni-dellassorbanza-il-modo-rapido-per-determinare-la-concentrazione-del-campione-2\/","title":{"rendered":"Misurazioni dell’assorbanza: il modo rapido per determinare la concentrazione del campione"},"content":{"rendered":"\n

All’interno delle applicazioni molecolari e biochimiche, cos\u00ec come nella diagnostica medica, la determinazione delle concentrazioni di sostanze in soluzione \u00e8 un passaggio cruciale dell’analisi. Spesso a questo scopo vengono impiegati metodi fotometrici, in quanto possono essere eseguiti facilmente e rapidamente e poich\u00e9 rappresentano spesso l’opzione pi\u00f9 conveniente.<\/p>\n\n

In generale, i metodi (spettro)-fotometrici si basano sul principio che le molecole in soluzione assorbono la luce e che la luce cos\u00ec indebolita viene misurata con l’aiuto di un rivelatore. Come implicito nel nome, gli spettrofotometri UV\/Vis utilizzano la luce visibile e ultravioletta nell’intervallo di lunghezze d’onda tra circa 200 e 900 nm.<\/p>\n\n

Per determinare la concentrazione di un analita, il pi\u00f9 delle volte viene utilizzata la lunghezza d’onda alla quale la molecola mostra la massima assorbanza (lunghezza d’onda di picco). Nel caso degli acidi nucleici e delle proteine, ad esempio, questo sarebbe rispettivamente di 260 nm e 280 nm. Le leggi della fisica descritte dalla legge di Lambert-Beer costituiscono la base per il calcolo della concentrazione di una sostanza da misurazioni fotometriche. Ci\u00f2 avviene secondo i passaggi delle formule elencate di seguito:<\/p>\n\n

  1. Trasmissione o trasmittanza (T) = I\/I 0<\/sub>La trasmissione \u00e8 determinata in un fotometro, utilizzando il rapporto tra la luce che esce e la luce che entra nel campione.<\/li>
  2. Assorbanza (A) = log (I 0<\/sub> \/I)L’assorbanza \u00e8 calcolata dal logaritmo decennale negativo della trasmissione.<\/li>
  3. Assorbanza (A) = C x L x \u0190 => Concentrazione (C) = A\/(L x \u0190)La legge di Lambert-Beer descrive la dipendenza dell’assorbanza dalla concentrazione del campione (C), dalla lunghezza del percorso ottico (L) e dalla dipendenza da un coefficiente di estinzione specifico del campione (\u0190), che appartiene a una sostanza specifica ad una determinata lunghezza d’onda. La concentrazione del campione viene quindi calcolata convertendo la formula.<\/li><\/ol>\n

    Queste tre affermazioni sono descritte pi\u00f9 dettagliatamente di seguito.Determinazione della trasmissione (T = I\/I 0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    Figura 1: Assemblaggio semplificato di un fotometro raffigurante il campione e i parametri rilevanti per la legge di Lambert-Beer<\/p>\n\n

    I 0<\/sub> : Luce che entra nel campioneI: Luce in uscita dal campioneC: Concentrazione del campioneL: Percorso ottico\/spessore del campione\u0190: Coefficiente di estinzione<\/em><\/p>\n\n

    Fondamentalmente, un fotometro \u00e8 costituito da una sorgente luminosa, una posizione che trattiene il campione e un rivelatore (figura 1). Il rivelatore misura l’intensit\u00e0 della luce che viaggia attraverso il campione. Naturalmente sono presenti numerosi altri componenti; in particolare, elementi ottici che rifrangono la luce e la separano in singole lunghezze d’onda, nonch\u00e9 elementi che riflettono o trasmettono la luce.<\/p>\n\n

    La sorgente luminosa di un fotometro emette luce a un’intensit\u00e0 definita I 0<\/sub> , che viene guidata attraverso la soluzione campione. Una parte della luce sar\u00e0 assorbita dal campione. La parte che attraversa il campione viene registrata dal rivelatore come intensit\u00e0 I. Il rapporto I\/I 0<\/sub> descrive la trasmissione del campione ad una lunghezza d’onda definita.<\/p>\n\n

    Calcolo dell’assorbanza (A = log (I 0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n

    I moderni fotometri convertono automaticamente la trasmissione di un campione in assorbanza, che \u00e8 definita come il logaritmo decennale negativo della trasmissione. Sorge la domanda sul perch\u00e9 la trasmissione non sia utilizzata direttamente per il calcolo della concentrazione del campione. La figura 2 chiarisce la connessione tra trasmissione e assorbanza. Se pi\u00f9 campioni, ciascuno dei quali permette al 50 % della luce che entra nel campione di attraversare, sono collegati in serie, risulter\u00e0 la curva di trasmissione in diminuzione esponenziale, illustrata di seguito. Se invece i valori sono espressi in modo logaritmico, risulter\u00e0 una dipendenza lineare. In questo modo, l’assorbanza \u00e8 proporzionale alla concentrazione (cos\u00ec come alla lunghezza del percorso), il che semplifica notevolmente i calcoli.<\/p>\n\n

    Figura 2: La connessione tra trasmissione e assorbanza della luce:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    a) Collegare i campioni in serie, ciascuno dei quali consente la trasmissione del 50 % della luce che entra nel campione. La percentuale si riferisce all’intensit\u00e0 luminosa iniziale.<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    b) Curva di trasmissione decrescente esponenzialmente<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    c) Rappresentazione grafica dell’assorbanza (utilizzando il logaritmo decennale di trasmissione)<\/p>\n\n

    Calcolo della concentrazione (C = A\/(L x \u0190))<\/u><\/strong>Per ricavare la concentrazione di un campione dalla sua assorbanza, sono necessarie ulteriori informazioni. La legge di Lambert-Beer, che costituisce la base fisica per le applicazioni fotometriche, descrive che l’assorbimento di luce da parte di un campione \u00e8 direttamente proporzionale alla sua concentrazione e alla sua lunghezza del percorso. Complessivamente, tre parametri contribuiscono al valore di assorbanza di un campione: primo, la concentrazione (C) della molecola; secondo, la lunghezza del percorso (L) del campione, che generalmente \u00e8 uguale alla lunghezza del percorso della cuvetta. Poi c’\u00e8 il coefficiente di estinzione (\u0190). Il coefficiente di estinzione \u00e8 una costante fisica unica della molecola; descrive la sua propriet\u00e0 di assorbire la luce a una specifica lunghezza d’onda. Questa costante specifica del materiale \u00e8 nota per un certo numero di sostanze, inclusi acidi nucleici e varie proteine, ei valori sono stati pubblicati nella letteratura pertinente. In questi casi, la concentrazione pu\u00f2 essere determinata istantaneamente. Se il valore non \u00e8 noto, tuttavia, \u00e8 possibile avvalersi dell’aiuto di una curva di calibrazione. Per generare una curva di calibrazione sono necessari degli standard, ovvero soluzioni che contengano concentrazioni note delle sostanze da analizzare. Questi vengono misurati nel fotometro prima del campione effettivo. La concentrazione dell’analita viene quindi calcolata utilizzando la curva standard.<\/p>\n\n

    Oltre alla quantificazione, le misurazioni dell’assorbanza possono anche rivelare informazioni qualitative sul campione: ad esempio, la purezza degli acidi nucleici e delle proteine pu\u00f2 essere determinata sottoponendo il campione a misurazioni a lunghezze d’onda aggiuntive, mentre le informazioni sull’attivit\u00e0 enzimatica sono generalmente ottenute attraverso misurazioni ripetute su volta.<\/p>\n\n

    Fonte<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    All’interno delle applicazioni molecolari e biochimiche, cos\u00ec come nella diagnostica medica, la determinazione delle concentrazioni di sostanze in soluzione \u00e8 un passaggio cruciale dell’analisi. Spesso a questo scopo vengono impiegati metodi fotometrici, in quanto possono essere eseguiti facilmente e rapidamente e poich\u00e9 rappresentano spesso l’opzione pi\u00f9 conveniente. In generale, i metodi (spettro)-fotometrici si basano sul<\/p>\n

    Read More<\/a><\/div>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_uag_custom_page_level_css":"","ub_ctt_via":"","footnotes":""},"categories":[833,835],"tags":[],"class_list":["post-69019","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-spettrofotometria","category-tutti-i-messaggi"],"featured_image_src":null,"author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/it\/author\/admin\/"},"uagb_featured_image_src":{"full":false,"thumbnail":false,"medium":false,"medium_large":false,"large":false,"1536x1536":false,"2048x2048":false,"bacola-woo-product":false,"woocommerce_thumbnail":false,"woocommerce_single":false,"woocommerce_gallery_thumbnail":false,"variation_swatches_image_size":false,"variation_swatches_tooltip_size":false,"dgwt-wcas-product-suggestion":false},"uagb_author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/it\/author\/admin\/"},"uagb_comment_info":0,"uagb_excerpt":"All’interno delle applicazioni molecolari e biochimiche, cos\u00ec come nella diagnostica medica, la determinazione delle concentrazioni di sostanze in soluzione \u00e8 un passaggio cruciale dell’analisi. Spesso a questo scopo vengono impiegati metodi fotometrici, in quanto possono essere eseguiti facilmente e rapidamente e poich\u00e9 rappresentano spesso l’opzione pi\u00f9 conveniente. In generale, i metodi (spettro)-fotometrici si basano sulRead…","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69019","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=69019"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69019\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":69022,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/69019\/revisions\/69022"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=69019"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=69019"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=69019"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}