{"id":69405,"date":"2022-02-21T15:42:52","date_gmt":"2022-02-21T07:42:52","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/suggerimenti-e-trucchi-per-misurazioni-fotometriche\/"},"modified":"2022-02-21T15:43:31","modified_gmt":"2022-02-21T07:43:31","slug":"suggerimenti-e-trucchi-per-misurazioni-fotometriche","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/qvarz.com\/it\/suggerimenti-e-trucchi-per-misurazioni-fotometriche\/","title":{"rendered":"Suggerimenti e trucchi per misurazioni fotometriche"},"content":{"rendered":"\n

\u00c8 utile tenere presente non solo il processo di misurazione fotometrico stesso, ma anche la sua configurazione, l’ambiente di misurazione e l’attrezzatura utilizzata.<\/strong><\/p>\n\n

Fonte immagine: mardon 333\/shutterstock.com<\/em><\/p>\n\n

La fotometria \u00e8 un metodo comune e di facile esecuzione per la determinazione delle concentrazioni di sostanze in soluzione ed \u00e8 anche in grado di valutare la purezza del campione. Tuttavia, nei casi in cui i valori non hanno un senso evidente, o se variano considerevolmente, la risoluzione dei problemi potrebbe essere complessa. \u00c8 quindi utile eliminare le possibili fonti di errore fin dall’inizio e prestare particolare attenzione alle seguenti considerazioni durante l’impostazione e l’esecuzione delle misurazioni fotometriche. <\/p>\n\n

Configurazione e ambiente<\/strong><\/p>\n\n

Solvente <\/strong>L’assorbanza di un campione \u00e8 influenzata dal suo pH e dalla forza ionica del suo solvente [1]. Si consigliano tamponi a basso contenuto di sale e pH neutro o leggermente alcalino, che prevengano variazioni di pH. Allo stesso tempo, l’assorbanza intrinseca del buffer alla lunghezza d’onda da misurare dovrebbe essere bassa per evitare possibili limitazioni dell’intervallo di misurazione. <\/p>\n\n

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Diluizione<\/strong>Nel caso di soluzioni campione altamente concentrate, pu\u00f2 essere necessaria la diluizione per rimanere all’interno dell’intervallo lineare di misurazione. Ideali sono diluizioni nell’intervallo 1:10. Non sono consigliate diluizioni superiori a 1:50 a causa del crescente rischio di imprecisioni introdotte tramite questa fase di pipettaggio. In linea di principio, per un pipettaggio accurato e preciso deve essere utilizzato un sistema calibrato di pipette e puntali. <\/p>\n\n

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Miscelazione<\/strong>In seguito alla preparazione delle diluizioni, ma anche dopo lunghi periodi di immobilit\u00e0, possono verificarsi differenze di concentrazione locali all’interno del campione. \u00c8 quindi importante miscelare accuratamente la soluzione campione prima e dopo ogni fase di diluizione, nonch\u00e9 immediatamente prima della misurazione. I migliori risultati si ottengono attraverso il vortex.<\/p>\n\n

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Temperatura<\/strong>L’ambiente e il fotometro, nonch\u00e9 le cuvette e i campioni, devono essere mantenuti a temperature identiche per evitare una deriva dei valori misurati. <\/p>\n\n

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Attrezzatura e misurazione<\/strong><\/h4>\n\n

cuvette<\/strong>Quando si selezionano le cuvette, la loro trasparenza alle lunghezze d’onda richieste, nonch\u00e9 la loro compatibilit\u00e0 con il rispettivo fotometro, sono tra i fattori decisivi pi\u00f9 importanti. Ci\u00f2 include, ad esempio, il coordinamento delle altezze dei percorsi luminosi e la garanzia che le cuvette siano riempite con volumi di campione sufficienti. Per ottenere risultati accurati, il bianco, cos\u00ec come i campioni, devono essere misurati nella stessa cuvetta, con la cuvetta sempre posizionata con lo stesso orientamento nello stelo della cuvetta.<\/p>\n\n

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Misurazione<\/strong>Prima della misurazione, occorre prestare attenzione per evitare la formazione di bolle d’aria all’interno della cuvetta che interromperebbero il percorso della luce (questo vale sia per il bianco che per i campioni). Le impostazioni del fotometro devono essere appropriate per il metodo, il campione e le cuvette selezionate. Dopo la misurazione, \u00e8 necessario verificare la plausibilit\u00e0 di tutti i risultati.<\/p>\n\n

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Riferimenti:<\/strong><\/p>\n\n

[1] Wilfinger WW, Mackey K, Chomczynski P. Effetto del pH e della forza ionica sulla valutazione spettrofotometrica della purezza dell’acido nucleico. Biotecniche<\/em> 1997; 22:474\u2013481.<\/p>\n\n

Fonte<\/a><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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