{"id":69020,"date":"2022-02-21T12:52:44","date_gmt":"2022-02-21T04:52:44","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/mesures-dabsorbance-le-moyen-rapide-de-determiner-la-concentration-de-lechantillon-2\/"},"modified":"2022-02-21T12:53:11","modified_gmt":"2022-02-21T04:53:11","slug":"mesures-dabsorbance-le-moyen-rapide-de-determiner-la-concentration-de-lechantillon-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/fr\/mesures-dabsorbance-le-moyen-rapide-de-determiner-la-concentration-de-lechantillon-2\/","title":{"rendered":"Mesures d&#8217;absorbance &#8211; le moyen rapide de d\u00e9terminer la concentration de l&#8217;\u00e9chantillon"},"content":{"rendered":"\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Dans les applications mol\u00e9culaires et biochimiques, ainsi que dans les diagnostics m\u00e9dicaux, la d\u00e9termination des concentrations de substances en solution est une \u00e9tape d&#8217;analyse cruciale. Souvent, des m\u00e9thodes photom\u00e9triques sont utilis\u00e9es \u00e0 cette fin, car elles peuvent \u00eatre r\u00e9alis\u00e9es facilement et rapidement, et parce qu&#8217;elles repr\u00e9sentent souvent l&#8217;option la plus rentable.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">En g\u00e9n\u00e9ral, les m\u00e9thodes (spectro)-photom\u00e9triques sont bas\u00e9es sur le principe que les mol\u00e9cules en solution absorbent la lumi\u00e8re, et que la lumi\u00e8re ainsi affaiblie est mesur\u00e9e \u00e0 l&#8217;aide d&#8217;un d\u00e9tecteur. Comme leur nom l&#8217;indique, les spectrophotom\u00e8tres UV\/Vis utilisent la lumi\u00e8re visible et ultraviolette dans la gamme de longueurs d&#8217;onde comprise entre environ 200 et 900 nm.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Afin de d\u00e9terminer la concentration d&#8217;un analyte, le plus souvent la longueur d&#8217;onde est utilis\u00e9e \u00e0 laquelle la mol\u00e9cule affiche l&#8217;absorbance la plus \u00e9lev\u00e9e (longueur d&#8217;onde maximale). Dans le cas des acides nucl\u00e9iques et des prot\u00e9ines, par exemple, ce serait 260 nm et 280 nm, respectivement. Les lois de la physique d\u00e9crites par la loi de Lambert-Beer constituent la base du calcul de la concentration d&#8217;une substance \u00e0 partir de mesures photom\u00e9triques. Cela se produit selon les \u00e9tapes des formules \u00e9num\u00e9r\u00e9es ci-dessous\u00a0:<\/p>\n\n<ol class=\"wp-block-list\"><li>Transmission ou transmittance (T) = I\/I <sub>0<\/sub><br\/>La transmission est d\u00e9termin\u00e9e dans un photom\u00e8tre, en utilisant le rapport entre la lumi\u00e8re qui sort et la lumi\u00e8re qui entre dans l&#8217;\u00e9chantillon.<\/li><li>Absorbance (A) = log (I <sub>0<\/sub> \/I)<br\/>L&#8217;absorbance est calcul\u00e9e \u00e0 partir du logarithme d\u00e9cadique n\u00e9gatif de la transmission.<\/li><li>Absorbance (A) = C x L x \u0190 =&gt; Concentration (C) = A\/(L x \u0190)<br\/>La loi de Lambert-Beer d\u00e9crit la d\u00e9pendance de l&#8217;absorbance \u00e0 la concentration de l&#8217;\u00e9chantillon (C), la longueur du chemin optique (L) ainsi que la d\u00e9pendance \u00e0 un coefficient d&#8217;extinction sp\u00e9cifique \u00e0 l&#8217;\u00e9chantillon (\u0190), qui se rapporte \u00e0 une substance sp\u00e9cifique \u00e0 une longueur d&#8217;onde sp\u00e9cifique. La concentration de l&#8217;\u00e9chantillon est ensuite calcul\u00e9e en convertissant la formule.<\/li><\/ol>\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Ces trois d\u00e9clarations sont d\u00e9crites plus en d\u00e9tail ci-dessous.<br\/><br\/><strong>D\u00e9termination de la transmission (T = I\/I <sub>0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><a href=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1.jpg\"><img fetchpriority=\"high\" decoding=\"async\" width=\"350\" height=\"229\" src=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-67852\" title=\"\" srcset=\"https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1.jpg 350w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1-83x54.jpg 83w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1-64x42.jpg 64w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-1-300x196.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 350px) 100vw, 350px\" \/><\/a><\/figure><\/div>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Figure 1 : Montage simplifi\u00e9 d&#8217;un photom\u00e8tre repr\u00e9sentant l&#8217;\u00e9chantillon et les param\u00e8tres pertinents pour la loi de Lambert-Beer<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><em>I <sub>0<\/sub> : Lumi\u00e8re entrant dans l&#8217;\u00e9chantillon<br\/>I : Lumi\u00e8re sortant de l&#8217;\u00e9chantillon<br\/>C : Concentration de l&#8217;\u00e9chantillon<br\/>L : trajet lumineux\/\u00e9paisseur de l&#8217;\u00e9chantillon<br\/>\u0190 : Coefficient d&#8217;extinction<\/em><\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Fondamentalement, un photom\u00e8tre se compose d&#8217;une source lumineuse, d&#8217;une position qui maintient l&#8217;\u00e9chantillon et d&#8217;un d\u00e9tecteur (figure 1). Le d\u00e9tecteur mesure l&#8217;intensit\u00e9 de la lumi\u00e8re qui traverse l&#8217;\u00e9chantillon. Naturellement, un certain nombre d&#8217;autres composants sont pr\u00e9sents ; sp\u00e9cifiquement, des \u00e9l\u00e9ments optiques qui r\u00e9fractent la lumi\u00e8re et la s\u00e9parent en longueurs d&#8217;onde individuelles ainsi que des \u00e9l\u00e9ments qui r\u00e9fl\u00e9chissent ou transmettent la lumi\u00e8re.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">La source lumineuse d&#8217;un photom\u00e8tre \u00e9met de la lumi\u00e8re \u00e0 une intensit\u00e9 d\u00e9finie I <sub>0<\/sub> , qui est guid\u00e9e \u00e0 travers la solution d&#8217;\u00e9chantillon. Une partie de la lumi\u00e8re sera absorb\u00e9e par l&#8217;\u00e9chantillon. La partie qui traverse l&#8217;\u00e9chantillon est enregistr\u00e9e par le d\u00e9tecteur comme intensit\u00e9 I. Le rapport I\/I <sub>0<\/sub> d\u00e9crit la transmission de l&#8217;\u00e9chantillon \u00e0 une longueur d&#8217;onde d\u00e9finie.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Calcul de l&#8217;absorbance (A = log (I <sub>0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Les photom\u00e8tres modernes convertissent automatiquement la transmission d&#8217;un \u00e9chantillon en absorbance, qui est d\u00e9finie comme le logarithme d\u00e9cadique n\u00e9gatif de la transmission. La question se pose de savoir pourquoi la transmission n&#8217;est pas directement utilis\u00e9e pour le calcul de la concentration de l&#8217;\u00e9chantillon. La figure 2 clarifie le lien entre la transmission et l&#8217;absorbance. Si plusieurs \u00e9chantillons, qui permettent chacun \u00e0 50 % de la lumi\u00e8re qui p\u00e9n\u00e8tre dans l&#8217;\u00e9chantillon de traverser, sont connect\u00e9s en s\u00e9rie, la courbe de transmission en d\u00e9clin exponentiel, illustr\u00e9e ci-dessous, en r\u00e9sultera. Si les valeurs sont plut\u00f4t exprim\u00e9es de mani\u00e8re logarithmique, une d\u00e9pendance lin\u00e9aire en r\u00e9sultera. De cette mani\u00e8re, l&#8217;absorbance est proportionnelle \u00e0 la concentration (ainsi qu&#8217;\u00e0 la longueur du trajet), ce qui simplifie consid\u00e9rablement les calculs.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong>Figure 2\u00a0: Le lien entre la transmission et l&#8217;absorbance de la lumi\u00e8re\u00a0:<\/strong><\/p>\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><a href=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2.jpg\"><img decoding=\"async\" width=\"474\" height=\"75\" src=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-67866\" title=\"\" srcset=\"https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2.jpg 474w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2-90x14.jpg 90w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2-64x10.jpg 64w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-2-300x47.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 474px) 100vw, 474px\" \/><\/a><\/figure><\/div>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">a) Connecter des \u00e9chantillons en s\u00e9rie, chacun d&#8217;entre eux permettant la transmission de 50 % de la lumi\u00e8re qui p\u00e9n\u00e8tre dans l&#8217;\u00e9chantillon. Le pourcentage se rapporte \u00e0 l&#8217;intensit\u00e9 lumineuse initiale.<\/p>\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><a href=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3.jpg\"><img decoding=\"async\" width=\"588\" height=\"275\" src=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-67880\" title=\"\" srcset=\"https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3.jpg 588w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3-90x42.jpg 90w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3-64x30.jpg 64w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-3-300x140.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 588px) 100vw, 588px\" \/><\/a><\/figure><\/div>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">b) Courbe de transmission en d\u00e9clin exponentiel<\/p>\n\n<div class=\"wp-block-image\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><a href=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4.jpg\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"588\" height=\"275\" src=\"\/\/i0.wp.com\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4.jpg\" alt=\"\" class=\"wp-image-67894\" title=\"\" srcset=\"https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4.jpg 588w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4-90x42.jpg 90w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4-64x30.jpg 64w, https:\/\/qvarz.com\/wp-content\/uploads\/2022\/02\/Absorbance-Measurements-4-300x140.jpg 300w\" sizes=\"(max-width: 588px) 100vw, 588px\" \/><\/a><\/figure><\/div>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">c) Repr\u00e9sentation graphique de l&#8217;absorbance (utilisant le logarithme d\u00e9cadique de transmission)<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><strong><u>Calcul de la concentration (C = A\/(L x \u0190))<\/u><\/strong><br\/><br\/>Afin de d\u00e9river la concentration d&#8217;un \u00e9chantillon \u00e0 partir de son absorbance, des informations suppl\u00e9mentaires sont n\u00e9cessaires. La loi de Lambert-Beer, qui constitue la base physique des applications photom\u00e9triques, d\u00e9crit que l&#8217;absorption de la lumi\u00e8re par un \u00e9chantillon est directement proportionnelle \u00e0 sa concentration et \u00e0 sa longueur de trajet. Au total, trois param\u00e8tres contribuent \u00e0 la valeur d&#8217;absorbance d&#8217;un \u00e9chantillon : premi\u00e8rement, la concentration (C) de la mol\u00e9cule ; deuxi\u00e8mement, la longueur du trajet (L) de l&#8217;\u00e9chantillon, qui est g\u00e9n\u00e9ralement \u00e9gale \u00e0 la longueur du trajet de la cuvette. Ensuite, il y a le coefficient d&#8217;extinction (\u0190). Le coefficient d&#8217;extinction est une constante physique unique \u00e0 la mol\u00e9cule ; il d\u00e9crit sa propri\u00e9t\u00e9 d&#8217;absorber la lumi\u00e8re \u00e0 une longueur d&#8217;onde sp\u00e9cifique. Cette constante sp\u00e9cifique au mat\u00e9riau est connue pour un certain nombre de substances, y compris les acides nucl\u00e9iques et diverses prot\u00e9ines, et les valeurs ont \u00e9t\u00e9 publi\u00e9es dans la litt\u00e9rature pertinente. Dans ces cas, la concentration peut \u00eatre d\u00e9termin\u00e9e instantan\u00e9ment. Si la valeur n&#8217;est pas connue, il est toutefois possible de s&#8217;aider d&#8217;une courbe d&#8217;\u00e9talonnage. Afin de g\u00e9n\u00e9rer une courbe d&#8217;\u00e9talonnage, des standards sont n\u00e9cessaires, c&#8217;est-\u00e0-dire des solutions qui contiennent des concentrations connues des substances \u00e0 analyser. Ceux-ci sont mesur\u00e9s dans le photom\u00e8tre avant l&#8217;\u00e9chantillon r\u00e9el. La concentration de l&#8217;analyte est ensuite calcul\u00e9e \u00e0 l&#8217;aide de la courbe standard.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\">Outre la quantification, les mesures d&#8217;absorbance peuvent \u00e9galement r\u00e9v\u00e9ler des informations qualitatives sur l&#8217;\u00e9chantillon\u00a0: par exemple, la puret\u00e9 des acides nucl\u00e9iques et des prot\u00e9ines peut \u00eatre d\u00e9termin\u00e9e en soumettant l&#8217;\u00e9chantillon \u00e0 des mesures \u00e0 des longueurs d&#8217;onde suppl\u00e9mentaires, alors que les informations sur l&#8217;activit\u00e9 enzymatique sont g\u00e9n\u00e9ralement obtenues par des mesures r\u00e9p\u00e9t\u00e9es sur temps.<\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><a href=\"https:\/\/handling-solutions.eppendorf.com\/sample-handling\/photometry\/principles\/detailview-principles\/news\/absorbance-measurements-the-quick-way-to-determine-sample-concentration\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">La source<\/a><\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><\/p>\n\n<p class=\"wp-block-paragraph\"><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Dans les applications mol\u00e9culaires et biochimiques, ainsi que dans les diagnostics m\u00e9dicaux, la d\u00e9termination des concentrations de substances en solution est une \u00e9tape d&#8217;analyse cruciale. 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