{"id":69404,"date":"2022-02-21T15:42:52","date_gmt":"2022-02-21T07:42:52","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/trucs-et-astuces-pour-les-mesures-photometriques\/"},"modified":"2022-02-21T15:43:31","modified_gmt":"2022-02-21T07:43:31","slug":"trucs-et-astuces-pour-les-mesures-photometriques","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/qvarz.com\/fr\/trucs-et-astuces-pour-les-mesures-photometriques\/","title":{"rendered":"Trucs et astuces pour les mesures photom\u00e9triques"},"content":{"rendered":"\n

Il est utile de garder \u00e0 l’esprit non seulement le processus de mesure photom\u00e9trique lui-m\u00eame, mais \u00e9galement sa configuration, l’environnement de mesure et l’\u00e9quipement utilis\u00e9.<\/strong><\/p>\n\n

Source de l’image : marodon 333\/shutterstock.com<\/em><\/p>\n\n

La photom\u00e9trie est une m\u00e9thode courante et facile \u00e0 r\u00e9aliser pour la d\u00e9termination des concentrations de substances en solution, et elle est \u00e9galement capable d’\u00e9valuer la puret\u00e9 de l’\u00e9chantillon. Cependant, dans les cas o\u00f9 les valeurs n’ont pas de sens \u00e9vident, ou si elles varient consid\u00e9rablement, le d\u00e9pannage peut \u00eatre complexe. Il est donc utile d’\u00e9liminer d\u00e8s le d\u00e9part les sources d’erreur possibles et de pr\u00eater une attention particuli\u00e8re aux consid\u00e9rations suivantes lors de la configuration et de la r\u00e9alisation des mesures photom\u00e9triques. <\/p>\n\n

Installation et environnement<\/strong><\/p>\n\n

Solvant <\/strong>L’absorbance d’un \u00e9chantillon est influenc\u00e9e par son pH et la force ionique de son solvant [1]. Des tampons \u00e0 faible teneur en sel et \u00e0 pH neutre ou l\u00e9g\u00e8rement alcalin, qui \u00e9vitent les variations de pH, sont recommand\u00e9s. Dans le m\u00eame temps, l’absorbance inh\u00e9rente du tampon \u00e0 la longueur d’onde mesur\u00e9e doit \u00eatre faible afin d’\u00e9viter d’\u00e9ventuelles limitations de la plage de mesure. <\/p>\n\n

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Dilution<\/strong>Dans le cas de solutions d’\u00e9chantillon tr\u00e8s concentr\u00e9es, une dilution peut \u00eatre n\u00e9cessaire afin de rester dans la plage lin\u00e9aire de mesure. Des dilutions de l’ordre de 1:10 sont id\u00e9ales. Les dilutions sup\u00e9rieures \u00e0 1:50 ne sont pas recommand\u00e9es en raison du risque croissant d’impr\u00e9cisions introduites par cette \u00e9tape de pipetage. En principe, un syst\u00e8me calibr\u00e9 de pipette et de pointes de pipette doit \u00eatre utilis\u00e9 pour un pipetage pr\u00e9cis et pr\u00e9cis. <\/p>\n\n

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M\u00e9lange<\/strong>Suite \u00e0 la pr\u00e9paration des dilutions, mais aussi apr\u00e8s de longues p\u00e9riodes d’immobilit\u00e9, des diff\u00e9rences locales de concentration peuvent appara\u00eetre au sein de l’\u00e9chantillon. Il est donc important de bien m\u00e9langer la solution d’\u00e9chantillon avant et apr\u00e8s chaque \u00e9tape de dilution, ainsi qu’imm\u00e9diatement avant la mesure. Les meilleurs r\u00e9sultats sont obtenus par vortex.<\/p>\n\n

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Temp\u00e9rature<\/strong>L’environnement et le photom\u00e8tre, ainsi que les cuvettes et les \u00e9chantillons, doivent \u00eatre maintenus \u00e0 des temp\u00e9ratures identiques afin d’\u00e9viter une d\u00e9rive des valeurs mesur\u00e9es. <\/p>\n\n

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\u00c9quipement & Mesure<\/strong><\/h4>\n\n

Cuves<\/strong>Lors de la s\u00e9lection des cuvettes, leur transparence aux longueurs d’onde requises, ainsi que leur compatibilit\u00e9 avec le photom\u00e8tre respectif, sont parmi les facteurs d\u00e9cisifs les plus importants. Cela comprend, par exemple, la coordination des hauteurs des trajets lumineux et la garantie que les cuvettes sont remplies de volumes d’\u00e9chantillon suffisants. Afin d’obtenir des r\u00e9sultats pr\u00e9cis, le blanc, ainsi que les \u00e9chantillons, doivent \u00eatre mesur\u00e9s dans la m\u00eame cuvette, la cuvette \u00e9tant toujours positionn\u00e9e dans la m\u00eame orientation dans le puits de cuvette.<\/p>\n\n

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La mesure<\/strong>Avant la mesure, il faut veiller \u00e0 \u00e9viter la formation de bulles d’air \u00e0 l’int\u00e9rieur de la cuvette qui interrompraient le trajet de la lumi\u00e8re (ceci s’applique \u00e0 la fois au blanc et aux \u00e9chantillons). Les param\u00e8tres du photom\u00e8tre doivent \u00eatre adapt\u00e9s \u00e0 la m\u00e9thode, \u00e0 l’\u00e9chantillon et aux cuvettes s\u00e9lectionn\u00e9s. Apr\u00e8s la mesure, tous les r\u00e9sultats doivent \u00eatre v\u00e9rifi\u00e9s quant \u00e0 leur plausibilit\u00e9.<\/p>\n\n

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Les r\u00e9f\u00e9rences:<\/strong><\/p>\n\n

[1] Wilfinger WW, Mackey K, Chomczynski P. Effet du pH et de la force ionique sur l’\u00e9valuation spectrophotom\u00e9trique de la puret\u00e9 des acides nucl\u00e9iques. BioTechniques<\/em> 1997; 22:474\u2013481.<\/p>\n\n

La source<\/a><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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