{"id":68369,"date":"2022-02-21T11:22:20","date_gmt":"2022-02-21T03:22:20","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/absorbanssimittaukset-nopea-tapa-maarittaa-naytteen-pitoisuus\/"},"modified":"2022-02-21T11:23:08","modified_gmt":"2022-02-21T03:23:08","slug":"absorbanssimittaukset-nopea-tapa-maarittaa-naytteen-pitoisuus","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/absorbanssimittaukset-nopea-tapa-maarittaa-naytteen-pitoisuus\/","title":{"rendered":"Absorbanssimittaukset \u2013 nopea tapa m\u00e4\u00e4ritt\u00e4\u00e4 n\u00e4ytteen pitoisuus"},"content":{"rendered":"\n

Molekyyli- ja biokemiallisissa sovelluksissa sek\u00e4 l\u00e4\u00e4ketieteellisess\u00e4 diagnostiikassa aineiden pitoisuuksien m\u00e4\u00e4ritt\u00e4minen liuoksessa on ratkaiseva analyysivaihe. Usein t\u00e4h\u00e4n tarkoitukseen k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n fotometrisi\u00e4 menetelmi\u00e4, koska ne voidaan suorittaa helposti ja nopeasti ja koska ne ovat usein kustannustehokkain vaihtoehto.<\/strong><\/p>\n\n

Yleisesti (spektro)fotometriset menetelm\u00e4t perustuvat siihen periaatteeseen, ett\u00e4 liuoksessa olevat molekyylit absorboivat valoa ja ett\u00e4 n\u00e4in heikentynyt valo mitataan detektorin avulla. Kuten nimest\u00e4 k\u00e4y ilmi, UV\/Vis-spektrofotometrit k\u00e4ytt\u00e4v\u00e4t n\u00e4kyv\u00e4\u00e4 ja ultraviolettivaloa aallonpituusalueella noin 200-900 nm.<\/p>\n\n

Analyytin pitoisuuden m\u00e4\u00e4ritt\u00e4miseksi k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n useimmiten sit\u00e4 aallonpituutta, jolla molekyylill\u00e4 on suurin absorbanssi (huippuaallonpituus). Esimerkiksi nukleiinihappojen ja proteiinien tapauksessa t\u00e4m\u00e4 olisi 260 nm ja 280 nm, vastaavasti. Lambert-Beerin lain kuvaamat fysiikan lait muodostavat perustan aineen pitoisuuden laskemiselle fotometrisista mittauksista. T\u00e4m\u00e4 tapahtuu alla lueteltujen kaavojen vaiheiden mukaisesti:<\/p>\n\n

  1. Transmissio tai l\u00e4p\u00e4isykyky (T) = I\/I 0<\/sub>L\u00e4p\u00e4isy m\u00e4\u00e4ritet\u00e4\u00e4n fotometriss\u00e4 k\u00e4ytt\u00e4m\u00e4ll\u00e4 ulos tulevan valon ja n\u00e4ytteeseen tulevan valon suhdetta.<\/li>
  2. Absorbanssi (A) = log (I 0<\/sub> \/I)Absorbanssi lasketaan l\u00e4hetyksen negatiivisesta dekadisesta logaritmista.<\/li>
  3. Absorbanssi (A) = C x L x \u0190 => Pitoisuus (C) = A\/(L x \u0190)Lambert-Beer-laki kuvaa absorbanssin riippuvuutta n\u00e4ytteen pitoisuudesta (C), optisen polun pituudesta (L) sek\u00e4 riippuvuutta n\u00e4ytekohtaisesta ekstinktiokerroimesta (\u0190), joka koskee tietty\u00e4 ainetta. tietyll\u00e4 aallonpituudella. N\u00e4ytteen pitoisuus lasketaan sitten muuntamalla kaava.<\/li><\/ol>\n

    N\u00e4it\u00e4 kolmea lausuntoa kuvataan yksityiskohtaisemmin alla.<\/p>\n\n

    L\u00e4hetyksen m\u00e4\u00e4ritys (T = I\/I 0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a>
    Kuva 1: Fotometrin yksinkertaistettu kokoonpano, joka kuvaa n\u00e4ytett\u00e4 ja parametreja, jotka ovat merkityksellisi\u00e4 Lambert-Beerin lain kannalta<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n

    I 0<\/sub> : Valo tulee n\u00e4ytteeseenI: Valo poistuu n\u00e4ytteest\u00e4C: N\u00e4ytteen pitoisuusL: Valon reitti\/n\u00e4ytteen paksuus\u0190: Ekstinktiokerroin<\/em><\/p>\n\n

    Pohjimmiltaan fotometri koostuu valonl\u00e4hteest\u00e4, asennosta, jossa n\u00e4yte pit\u00e4\u00e4, ja ilmaisimesta (kuva 1). Ilmaisin mittaa n\u00e4ytteen l\u00e4pi kulkevan valon voimakkuutta. Luonnollisesti mukana on useita muita komponentteja; erityisesti optiset elementit, jotka taittavat valon ja erottavat sen yksitt\u00e4isiksi aallonpituuksiksi sek\u00e4 elementit, jotka heijastavat tai l\u00e4hett\u00e4v\u00e4t valoa.<\/p>\n\n

    Fotometrin valonl\u00e4hde l\u00e4hett\u00e4\u00e4 m\u00e4\u00e4r\u00e4tyll\u00e4 intensiteetill\u00e4 I 0<\/sub> valoa, joka ohjataan n\u00e4yteliuoksen l\u00e4pi. N\u00e4yte absorboi osan valosta. Ilmaisin rekister\u00f6i osan, joka kulkee n\u00e4ytteen l\u00e4pi, intensiteetiksi I. Suhde I\/I 0<\/sub> kuvaa n\u00e4ytteen l\u00e4p\u00e4isy\u00e4 m\u00e4\u00e4r\u00e4tyll\u00e4 aallonpituudella.<\/p>\n\n

    Absorbanssin laskeminen (A = log (I 0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n

    Nykyaikaiset fotometrit muuttavat automaattisesti n\u00e4ytteen l\u00e4p\u00e4isyn absorbanssiksi, joka m\u00e4\u00e4ritell\u00e4\u00e4n l\u00e4p\u00e4isyn negatiiviseksi dekadiseksi logaritmiksi. Her\u00e4\u00e4 kysymys, miksi l\u00e4hetyst\u00e4 ei k\u00e4ytet\u00e4 suoraan n\u00e4ytepitoisuuden laskemiseen. Kuva 2 selvent\u00e4\u00e4 transmission ja absorbanssin v\u00e4list\u00e4 yhteytt\u00e4. Jos useita n\u00e4ytteit\u00e4, joista kukin sallii kulkea 50 % n\u00e4ytteeseen tulevasta valosta, kytket\u00e4\u00e4n sarjaan, tuloksena on eksponentiaalisesti laskeva l\u00e4hetysk\u00e4yr\u00e4, joka on kuvattu alla. Jos arvot ilmaistaan sen sijaan logaritmisella tavalla, tuloksena on lineaarinen riippuvuus. T\u00e4ll\u00e4 tavalla absorbanssi on verrannollinen pitoisuuteen (sek\u00e4 polun pituuteen), mik\u00e4 yksinkertaistaa laskelmia huomattavasti.<\/p>\n\n

    Kuva 2: Valon l\u00e4p\u00e4isyn ja absorbanssin v\u00e4linen yhteys:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a>
    a) N\u00e4ytteiden kytkeminen sarjaan, joista jokainen mahdollistaa 50 % n\u00e4ytteeseen tulevan valon l\u00e4p\u00e4isyn. Prosenttiosuus koskee alkuper\u00e4ist\u00e4 valon voimakkuutta.<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n
    \"\"<\/a>
    b) Eksponentiaalisesti laskeva l\u00e4hetysk\u00e4yr\u00e4<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n
    \"\"<\/a>
    c) Absorbanssin graafinen esitys (k\u00e4ytt\u00e4en l\u00e4hetyksen dekadista logaritmia)<\/figcaption><\/figure><\/div>\n\n

    Pitoisuuden laskeminen (C = A\/(L x \u0190))<\/strong><\/p>\n\n

    N\u00e4ytteen pitoisuuden johtamiseksi sen absorbanssista tarvitaan lis\u00e4tietoja. Lambert-Beerin laki, joka muodostaa fotometristen sovellusten fyysisen perustan, kuvaa, ett\u00e4 n\u00e4ytteen valon absorptio on suoraan verrannollinen sen pitoisuuteen ja sen polun pituuteen. Kaiken kaikkiaan kolme parametria vaikuttavat n\u00e4ytteen absorbanssiarvoon: ensinn\u00e4kin molekyylin pitoisuus (C); toiseksi n\u00e4ytteen polun pituus (L), joka yleens\u00e4 on sama kuin kyvetin polun pituus. Sitten on ekstinktiokerroin (\u0190). Ekstinktiokerroin on molekyylille ainutlaatuinen fysikaalinen vakio; se kuvaa sen ominaisuutta absorboida valoa tietyll\u00e4 aallonpituudella. T\u00e4m\u00e4 materiaalispesifinen vakio tunnetaan useille aineille, mukaan lukien nukleiinihapot ja erilaiset proteiinit, ja arvot on julkaistu asiaa koskevassa kirjallisuudessa. N\u00e4iss\u00e4 tapauksissa pitoisuus voidaan m\u00e4\u00e4ritt\u00e4\u00e4 v\u00e4litt\u00f6m\u00e4sti. Jos arvoa ei kuitenkaan tunneta, on mahdollista k\u00e4ytt\u00e4\u00e4 avuksi kalibrointik\u00e4yr\u00e4\u00e4. Kalibrointik\u00e4yr\u00e4n muodostamiseksi tarvitaan standardeja, eli liuoksia, jotka sis\u00e4lt\u00e4v\u00e4t tunnetut pitoisuudet analysoitavia aineita. N\u00e4m\u00e4 mitataan fotometrill\u00e4 ennen varsinaista n\u00e4ytett\u00e4. Analyytin pitoisuus lasketaan sitten k\u00e4ytt\u00e4m\u00e4ll\u00e4 standardik\u00e4yr\u00e4\u00e4.<\/p>\n\n

    Kvantifioinnin lis\u00e4ksi absorbanssimittaukset voivat paljastaa my\u00f6s kvalitatiivista tietoa n\u00e4ytteest\u00e4: esimerkiksi nukleiinihappojen ja proteiinien puhtaus voidaan m\u00e4\u00e4ritt\u00e4\u00e4 mittaamalla n\u00e4yte ylim\u00e4\u00e4r\u00e4isill\u00e4 aallonpituuksilla, kun taas entsyymiaktiivisuustiedot saadaan yleens\u00e4 toistuvina mittauksina. aika.<\/p>\n\n

    L\u00e4hde<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    Molekyyli- ja biokemiallisissa sovelluksissa sek\u00e4 l\u00e4\u00e4ketieteellisess\u00e4 diagnostiikassa aineiden pitoisuuksien m\u00e4\u00e4ritt\u00e4minen liuoksessa on ratkaiseva analyysivaihe. Usein t\u00e4h\u00e4n tarkoitukseen k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n fotometrisi\u00e4 menetelmi\u00e4, koska ne voidaan suorittaa helposti ja nopeasti ja koska ne ovat usein kustannustehokkain vaihtoehto. Yleisesti (spektro)fotometriset menetelm\u00e4t perustuvat siihen periaatteeseen, ett\u00e4 liuoksessa olevat molekyylit absorboivat valoa ja ett\u00e4 n\u00e4in heikentynyt valo mitataan detektorin avulla. Kuten<\/p>\n

    Read More<\/a><\/div>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_uag_custom_page_level_css":"","ub_ctt_via":"","footnotes":""},"categories":[824,831],"tags":[],"class_list":["post-68369","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-kaikki-viestit","category-spektrofotometria-fi"],"featured_image_src":null,"author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/author\/admin\/"},"uagb_featured_image_src":{"full":false,"thumbnail":false,"medium":false,"medium_large":false,"large":false,"1536x1536":false,"2048x2048":false,"bacola-woo-product":false,"woocommerce_thumbnail":false,"woocommerce_single":false,"woocommerce_gallery_thumbnail":false,"variation_swatches_image_size":false,"variation_swatches_tooltip_size":false,"dgwt-wcas-product-suggestion":false},"uagb_author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/author\/admin\/"},"uagb_comment_info":0,"uagb_excerpt":"Molekyyli- ja biokemiallisissa sovelluksissa sek\u00e4 l\u00e4\u00e4ketieteellisess\u00e4 diagnostiikassa aineiden pitoisuuksien m\u00e4\u00e4ritt\u00e4minen liuoksessa on ratkaiseva analyysivaihe. Usein t\u00e4h\u00e4n tarkoitukseen k\u00e4ytet\u00e4\u00e4n fotometrisi\u00e4 menetelmi\u00e4, koska ne voidaan suorittaa helposti ja nopeasti ja koska ne ovat usein kustannustehokkain vaihtoehto. Yleisesti (spektro)fotometriset menetelm\u00e4t perustuvat siihen periaatteeseen, ett\u00e4 liuoksessa olevat molekyylit absorboivat valoa ja ett\u00e4 n\u00e4in heikentynyt valo mitataan detektorin avulla. KutenRead…","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68369","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=68369"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68369\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":68373,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68369\/revisions\/68373"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=68369"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=68369"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/fi\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=68369"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}