{"id":68994,"date":"2022-02-21T12:51:46","date_gmt":"2022-02-21T04:51:46","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/mediciones-de-absorbancia-la-forma-rapida-de-determinar-la-concentracion-de-la-muestra-2\/"},"modified":"2022-02-21T12:52:55","modified_gmt":"2022-02-21T04:52:55","slug":"mediciones-de-absorbancia-la-forma-rapida-de-determinar-la-concentracion-de-la-muestra-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/es\/mediciones-de-absorbancia-la-forma-rapida-de-determinar-la-concentracion-de-la-muestra-2\/","title":{"rendered":"Mediciones de absorbancia: la forma r\u00e1pida de determinar la concentraci\u00f3n de la muestra"},"content":{"rendered":"\n

Dentro de las aplicaciones moleculares y bioqu\u00edmicas, as\u00ed como en el diagn\u00f3stico m\u00e9dico, la determinaci\u00f3n de las concentraciones de sustancias en soluci\u00f3n es un paso crucial del an\u00e1lisis. Con frecuencia, los m\u00e9todos fotom\u00e9tricos se emplean para este prop\u00f3sito, ya que estos se pueden realizar de manera f\u00e1cil y r\u00e1pida, y porque a menudo representan la opci\u00f3n m\u00e1s rentable.<\/p>\n\n

En general, los m\u00e9todos (espectro)fotom\u00e9tricos se basan en el principio de que las mol\u00e9culas en soluci\u00f3n absorben la luz y que la luz as\u00ed debilitada se mide con la ayuda de un detector. Como implica el nombre, los espectrofot\u00f3metros UV\/Vis utilizan luz visible y ultravioleta en el rango de longitud de onda entre aproximadamente 200 y 900 nm.<\/p>\n\n

Para determinar la concentraci\u00f3n de un analito, la mayor\u00eda de las veces se utiliza la longitud de onda en la que la mol\u00e9cula muestra la absorbancia m\u00e1s alta (longitud de onda m\u00e1xima). En el caso de los \u00e1cidos nucleicos y las prote\u00ednas, por ejemplo, ser\u00edan 260 nm y 280 nm, respectivamente. Las leyes de la f\u00edsica descritas por la ley de Lambert-Beer forman la base para el c\u00e1lculo de la concentraci\u00f3n de una sustancia a partir de mediciones fotom\u00e9tricas. Esto ocurre de acuerdo con los pasos de las f\u00f3rmulas que se enumeran a continuaci\u00f3n:<\/p>\n\n

  1. Transmisi\u00f3n o transmitancia (T) = I\/I 0<\/sub>La transmisi\u00f3n se determina en un fot\u00f3metro, utilizando la relaci\u00f3n entre la luz que sale y la luz que entra en la muestra.<\/li>
  2. Absorbancia (A) = log (I 0<\/sub> \/I)La absorbancia se calcula a partir del logaritmo dec\u00e1dico negativo de transmisi\u00f3n.<\/li>
  3. Absorbancia (A) = C x L x \u0190 => Concentraci\u00f3n (C) = A\/(L x \u0190)La ley de Lambert-Beer describe la dependencia de la absorbancia de la concentraci\u00f3n de la muestra (C), la longitud del camino \u00f3ptico (L), as\u00ed como la dependencia del coeficiente de extinci\u00f3n espec\u00edfico de la muestra (\u0190), que pertenece a una sustancia espec\u00edfica. en una longitud de onda espec\u00edfica. Luego se calcula la concentraci\u00f3n de la muestra convirtiendo la f\u00f3rmula.<\/li><\/ol>\n

    Estas tres declaraciones se describen con m\u00e1s detalle a continuaci\u00f3n.Determinaci\u00f3n de la transmisi\u00f3n (T = I\/I 0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    Figura 1: Montaje simplificado de un fot\u00f3metro que representa la muestra y los par\u00e1metros que son relevantes para la ley de Lambert-Beer<\/p>\n\n

    I 0<\/sub> : Luz que entra en la muestraI: Luz que sale de la muestraC: Concentraci\u00f3n de la muestraL: Paso de luz\/grosor de la muestra\u0190: Coeficiente de extinci\u00f3n<\/em><\/p>\n\n

    B\u00e1sicamente, un fot\u00f3metro consta de una fuente de luz, una posici\u00f3n que sostiene la muestra y un detector (figura 1). El detector mide la intensidad de la luz que viaja a trav\u00e9s de la muestra. Naturalmente, est\u00e1n presentes varios otros componentes; espec\u00edficamente, elementos \u00f3pticos que refractan la luz y la separan en longitudes de onda individuales as\u00ed como elementos que reflejan o transmiten la luz.<\/p>\n\n

    La fuente de luz de un fot\u00f3metro emite luz con una intensidad I 0<\/sub> definida, que es guiada a trav\u00e9s de la soluci\u00f3n de muestra. Una parte de la luz ser\u00e1 absorbida por la muestra. La porci\u00f3n que atraviesa la muestra es registrada por el detector como intensidad I. La relaci\u00f3n I\/I 0<\/sub> describe la transmisi\u00f3n de la muestra a una longitud de onda definida.<\/p>\n\n

    C\u00e1lculo de la absorbancia (A = log (I 0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n

    Los fot\u00f3metros modernos convierten autom\u00e1ticamente la transmisi\u00f3n de una muestra en absorbancia, que se define como el logaritmo dec\u00e1dico negativo de transmisi\u00f3n. Surge la pregunta de por qu\u00e9 la transmisi\u00f3n no se utiliza directamente para el c\u00e1lculo de la concentraci\u00f3n de la muestra. La Figura 2 aclara la conexi\u00f3n entre transmisi\u00f3n y absorbancia. Si se conectan en serie varias muestras, cada una de las cuales permite el paso del 50 % de la luz que entra en la muestra, se obtendr\u00e1 la curva de transmisi\u00f3n exponencialmente decreciente, que se muestra a continuaci\u00f3n. Si, en cambio, los valores se expresan de forma logar\u00edtmica, se producir\u00e1 una dependencia lineal. De esta forma, la absorbancia es proporcional a la concentraci\u00f3n (as\u00ed como a la longitud del camino), lo que simplifica considerablemente los c\u00e1lculos.<\/p>\n\n

    Figura 2: La conexi\u00f3n entre la transmisi\u00f3n y la absorbancia de la luz:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    a) Conexi\u00f3n de muestras en serie, cada una de las cuales permita la transmisi\u00f3n del 50 % de la luz que ingresa a la muestra. El porcentaje se refiere a la intensidad de luz inicial.<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    b) Curva de transmisi\u00f3n exponencialmente decreciente<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    c) Representaci\u00f3n gr\u00e1fica de la absorbancia (utilizando el logaritmo dec\u00e1dico de transmisi\u00f3n)<\/p>\n\n

    C\u00e1lculo de la concentraci\u00f3n (C = A\/(L x \u0190))<\/u><\/strong>Para derivar la concentraci\u00f3n de una muestra a partir de su absorbancia, se requiere informaci\u00f3n adicional. La ley de Lambert-Beer, que constituye la base f\u00edsica de las aplicaciones fotom\u00e9tricas, describe que la absorci\u00f3n de luz por parte de una muestra es directamente proporcional a su concentraci\u00f3n y la longitud de su trayectoria. En total, tres par\u00e1metros contribuyen al valor de absorbancia de una muestra: primero, la concentraci\u00f3n (C) de la mol\u00e9cula; segundo, la longitud del camino (L) de la muestra, que generalmente es igual a la longitud del camino de la cubeta. Luego est\u00e1 el coeficiente de extinci\u00f3n (\u0190). El coeficiente de extinci\u00f3n es una constante f\u00edsica exclusiva de la mol\u00e9cula; describe su propiedad de absorber luz en una longitud de onda espec\u00edfica. Esta constante espec\u00edfica del material se conoce para varias sustancias, incluidos los \u00e1cidos nucleicos y varias prote\u00ednas, y los valores se han publicado en la literatura pertinente. En estos casos, la concentraci\u00f3n se puede determinar instant\u00e1neamente. Sin embargo, si no se conoce el valor, es posible obtener la ayuda de una curva de calibraci\u00f3n. Para generar una curva de calibraci\u00f3n, se requieren est\u00e1ndares, es decir, soluciones que contengan concentraciones conocidas de las sustancias a analizar. Estos se miden en el fot\u00f3metro antes de la muestra real. Luego se calcula la concentraci\u00f3n del analito usando la curva est\u00e1ndar.<\/p>\n\n

    Adem\u00e1s de la cuantificaci\u00f3n, las mediciones de absorbancia tambi\u00e9n pueden revelar informaci\u00f3n cualitativa sobre la muestra: por ejemplo, la pureza de los \u00e1cidos nucleicos y las prote\u00ednas se puede determinar sometiendo la muestra a mediciones en longitudes de onda adicionales, mientras que la informaci\u00f3n sobre la actividad enzim\u00e1tica generalmente se obtiene a trav\u00e9s de mediciones repetidas durante hora.<\/p>\n\n

    Fuente<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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