Επιλογή του κατάλληλου όγκου για τη μέτρηση των δειγμάτων σας
Ένα φασματοφωτόμετρο είναι ιδανικό για τον προσδιορισμό του πόσο ένα υλικό απορροφά ή μεταδίδει ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός, με αποτέλεσμα πληροφορίες συγκέντρωσης και καθαρότητας. Σε ένα κανονικό ερευνητικό εργαστήριο, ένα φασματοφωτόμετρο περιλαμβάνει έναν θάλαμο τυπικού μεγέθους στον οποίο εισάγεται μια κυψελίδα , επιτρέποντας σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος φωτός να διανύσει μια καθορισμένη απόσταση μέσω του δείγματος, γνωστή ως μήκος διαδρομής. Όταν επιλέγετε τη σωστή κυψελίδα για τα δείγματα και τις εφαρμογές σας, λάβετε υπόψη τον τύπο του δείγματος, τις ανάγκες όγκου, τα επίπεδα συγκέντρωσης και τις μετρήσεις που πρέπει να ληφθούν.
Όταν επιλέγετε μια κυβέτα, υπάρχουν τρεις επιλογές που πρέπει να λάβετε υπόψη:
- Μια macro κυβέτα απαιτεί χωρητικότητα μέτρησης 3,5 έως 35 ml.
- Μια συμβατική κυβέτα έχει χωρητικότητα μέτρησης 3,5 mL.
- Ένας προσαρμογέας μικροόγκων απαιτεί δείγματα που βρίσκονται στο εύρος ενός μικρολίτρου, συνήθως μεταξύ 2 ul και 3,5 mL.
Macro Cuvettes




Standard Cuvettes
(VASM7) 3.5mL Standard Absorption Cuvette with Screw Cap, Molded, Round Bottom, Lightpath 10mm

(VFPFA) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Stopper, Fused, Lightpath 10mm
(VFOFO3) 3.5mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 10mm
Micro Cuvettes
(VFOF2) 0.7mL Fluorescence Cuvette with PTFE Lid, Fused, Flat Base, Lightpath 2mm
(VFOF10) Κουβέτα μικρού ύψους 0,8 mL, 10×12,5×12,5 mm, 4 παράθυρα, Fused, Lightpath 10 mm
(VAOBM1) 0.35mL Semi-Micro Cuvette, PTFE Lid, Bonded, Width 1mm, 2 Windows
(VAOB100) 100uL Sub Micro Absorption Cuvette, All Black, Bonded, 2 Windows
Είναι επίσης σημαντικό να διασφαλίσετε ότι η κυψελίδα που θα επιλέξετε είναι διαφανής στα μήκη κύματος που θα χρησιμοποιήσετε για να δοκιμάσετε τα δείγματά σας. Αν και το γυαλί και το πολυστυρένιο είναι γενικά διαφανή στο ορατό φως, απορροφούν το υπεριώδες φως. Το γυαλί και το πολυστυρένιο είναι επομένως κατάλληλα για χρωματομετρικούς προσδιορισμούς πρωτεϊνών ή για την ανίχνευση της πυκνότητας μιας βακτηριακής καλλιέργειας, αλλά όχι για την ανίχνευση της συγκέντρωσης και της καθαρότητας των νουκλεϊκών οξέων στην περιοχή UV στα 230, 260 και 280 nm. Ο χαλαζίας και άλλα πολυμερή που είναι συμβατά με την υπεριώδη ακτινοβολία, από την άλλη πλευρά, είναι συνήθως διαφανή τόσο στο ορατό όσο και στο υπεριώδες φως, καθιστώντας τα ιδανικά για τη μέτρηση δειγμάτων υπεριώδους φωτός.
Τόσο η κυβέτα όσο και ο προσαρμογέας μικροόγκου έχουν πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα. Ακολουθούν μερικές ιδέες που θα σας βοηθήσουν να επιλέξετε το σωστό δοχείο για τη μέτρηση των δειγμάτων σας με ακρίβεια και συνέπεια.
Κουβέτες
Ανάλογα με το όργανο, τα φασματοφωτόμετρα λαμβάνουν μετρήσεις σε ένα από τα τρία ύψη φωτός οπτικής δέσμης (η απόσταση από το κάτω μέρος της κυβέτας, γνωστή και ως διάσταση Z ή ύψος φωτός): 8,5, 15 ή 20 mm. Τα περισσότερα φασματοφωτόμετρα δέχονται μακρο κυβέτες αφού έχουν ευθύ τοίχωμα. Οι μικροκυβέτες, από την άλλη πλευρά, έχουν το ίδιο εξωτερικό αποτύπωμα με τις τυπικές κυψελίδες, αλλά το εσωτερικό τους είναι γενικά κωνικό για να περιοριστεί η απαραίτητη ποσότητα υλικού δείγματος. Η τυπική κυψελίδα, από την άλλη πλευρά, προορίζεται για μέτρηση μέσω του δείγματος σε ένα συγκεκριμένο ύψος φωτός στον θάλαμο. Είναι σημαντικό να ελέγξετε ξανά ότι η διάσταση της κυψελίδας Z που χρησιμοποιείτε για να μετρήσετε το δείγμα σας είναι συμβατή με το ύψος φωτός του οργάνου σας. Εξετάστε τα ακόλουθα βασικά χαρακτηριστικά των κυβετών:
- Όταν μετράτε υλικά με χαμηλές συγκεντρώσεις, όπως RNA, μονόκλωνο DNA και ολιγονουκλεοτίδια, θα χρειαστείτε ένα αρκετά μεγάλο μήκος διαδρομής για να διατηρήσετε τις τιμές εντός του εύρους γραμμικής μέτρησης του οργάνου. Αν και ορισμένες κυβέτες που κυκλοφορούν τώρα στην αγορά επιτρέπουν εναλλακτικό μήκος διαδρομής, το τυπικό μέγεθος είναι 10 mm. Ορισμένες κυψελίδες διπλού μήκους διαδρομής μπορούν να περιστραφούν κατά 90 μοίρες για ανάγνωση σε άλλο μήκος διαδρομής.
- Συνιστάται η χρήση μιας αποστειρωμένης πλαστικής κυψελίδας μιας χρήσης εάν θέλετε να ανακτήσετε το δείγμα σας μετά από μια μέτρηση. Παρόλο που διατίθενται χύμα κυβέτες, ορισμένες εφαρμογές μπορεί να χρειάζονται ατομικά τυλιγμένες, αποστειρωμένες κυβέτες που είναι πιστοποιημένες χωρίς πρωτεΐνες ή χωρίς νουκλεάσες.
- Η απορρόφηση ενός δείγματος σε μήκος κύματος 600 nm, που συνήθως αναφέρεται ως “OD600”, χρησιμοποιείται για την εκτίμηση της συγκέντρωσης μιας βακτηριακής καλλιέργειας. Η μεγαλύτερη χωρητικότητα δείγματος μιας μακροκυβέτας επιτρέπει σε ετερογενή δείγματα όπως αυτά να παράγουν ακριβέστερη ανάγνωση.
Ένα τυπικό φασματοφωτόμετρο μπορεί να χωρέσει μια ποικιλία κυβετών, καθώς και έναν προσαρμογέα μικροόγκων. Ο τύπος του δείγματος, ο όγκος που χρησιμοποιείται, το μήκος διαδρομής και η διαφάνεια του υλικού της κυβέτας επηρεάζουν τον όγκο της κυβέτας που χρησιμοποιείται, δίνοντας στους επιστήμονες την ελευθερία να εκτελούν τα πειράματά τους με συνέπεια και σωστά. Ανατρέξτε λοιπόν στις επιλογές που συζητήσαμε, επιλέξτε το μήκος κύματος και το μήκος της διαδρομής και ξεκινήστε τη μέτρηση!
Recent Comments