{"id":69411,"date":"2022-02-21T15:43:15","date_gmt":"2022-02-21T07:43:15","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/tipps-tricks-fuer-photometrische-messungen\/"},"modified":"2022-02-21T15:43:48","modified_gmt":"2022-02-21T07:43:48","slug":"tipps-tricks-fuer-photometrische-messungen","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/qvarz.com\/de\/tipps-tricks-fuer-photometrische-messungen\/","title":{"rendered":"Tipps & Tricks f\u00fcr photometrische Messungen"},"content":{"rendered":"\n

Es ist hilfreich, nicht nur das photometrische Messverfahren selbst, sondern auch dessen Aufbau, die Messumgebung und die verwendeten Ger\u00e4te im Auge zu behalten.<\/strong><\/p>\n\n

Bildquelle: marodon 333\/shutterstock.com<\/em><\/p>\n\n

Die Photometrie ist eine g\u00e4ngige, einfach durchzuf\u00fchrende Methode zur Bestimmung von Konzentrationen von Stoffen in L\u00f6sung und kann auch die Probenreinheit beurteilen. In F\u00e4llen, in denen die Werte jedoch keinen offensichtlichen Sinn ergeben oder stark voneinander abweichen, kann die Fehlerbehebung komplex sein. Daher ist es hilfreich, m\u00f6gliche Fehlerquellen von vornherein auszuschlie\u00dfen und bei der Einrichtung und Durchf\u00fchrung photometrischer Messungen besonders auf die folgenden \u00dcberlegungen zu achten. <\/p>\n\n

Einrichtung & Umgebung<\/strong><\/p>\n\n

L\u00f6sungsmittel <\/strong>Die Extinktion einer Probe wird durch ihren pH-Wert und die Ionenst\u00e4rke ihres L\u00f6sungsmittels beeinflusst [1]. Empfehlenswert sind Puffer mit niedrigem Salzgehalt und einem neutralen oder leicht alkalischen pH-Wert, der Schwankungen des pH-Wertes vorbeugt. Gleichzeitig sollte die Eigenabsorption des Puffers bei der zu messenden Wellenl\u00e4nge gering sein, um m\u00f6gliche Einschr\u00e4nkungen des Messbereichs zu vermeiden. <\/p>\n\n

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Verd\u00fcnnung<\/strong>Bei hochkonzentrierten Probenl\u00f6sungen kann eine Verd\u00fcnnung erforderlich sein, um im linearen Messbereich zu bleiben. Ideal sind Verd\u00fcnnungen im Bereich von 1:10. Verd\u00fcnnungen \u00fcber 1:50 werden aufgrund des zunehmenden Risikos von Ungenauigkeiten, die durch diesen Pipettierschritt eingef\u00fchrt werden, nicht empfohlen. Grunds\u00e4tzlich muss f\u00fcr genaues und pr\u00e4zises Pipettieren ein kalibriertes System aus Pipette und Pipettenspitzen verwendet werden. <\/p>\n\n

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Mischen<\/strong>Nach Ansetzen von Verd\u00fcnnungen, aber auch nach l\u00e4ngerer Standzeit, k\u00f6nnen lokale Konzentrationsunterschiede innerhalb der Probe auftreten. Daher ist es wichtig, die Probenl\u00f6sung vor und nach jedem Verd\u00fcnnungsschritt sowie unmittelbar vor der Messung gr\u00fcndlich zu mischen. Beste Ergebnisse werden durch Vortexen erzielt.<\/p>\n\n

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Temperatur<\/strong>Umgebung und Photometer sowie K\u00fcvetten und Proben sollten auf identischen Temperaturen gehalten werden, um ein Driften der Messwerte zu vermeiden. <\/p>\n\n

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Ausr\u00fcstung & Messung<\/strong><\/h4>\n\n

K\u00fcvetten<\/strong>Bei der Auswahl der K\u00fcvetten geh\u00f6ren deren Transparenz bei den geforderten Wellenl\u00e4ngen sowie die Kompatibilit\u00e4t mit dem jeweiligen Photometer zu den wichtigsten Entscheidungskriterien. Dazu geh\u00f6rt beispielsweise die Abstimmung der H\u00f6hen der Lichtwege und die Sicherstellung, dass die K\u00fcvetten mit ausreichend Probenvolumen gef\u00fcllt sind. Um genaue Ergebnisse zu erhalten, sollten sowohl der Blindwert als auch die Proben in derselben K\u00fcvette gemessen werden, wobei die K\u00fcvette immer in derselben Ausrichtung im K\u00fcvettenschacht positioniert sein sollte.<\/p>\n\n

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Messung<\/strong>Vor der Messung muss darauf geachtet werden, dass sich keine Luftblasen in der K\u00fcvette bilden, die den Lichtweg unterbrechen w\u00fcrden (dies gilt sowohl f\u00fcr den Blindwert als auch f\u00fcr die Proben). Die Einstellungen des Photometers m\u00fcssen der Methode, der Probe und den gew\u00e4hlten K\u00fcvetten entsprechen. Nach der Messung sollten alle Ergebnisse auf Plausibilit\u00e4t \u00fcberpr\u00fcft werden.<\/p>\n\n

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Verweise:<\/strong><\/p>\n\n

[1] Wilfinger WW, Mackey K, Chomczynski P. Einfluss von pH und Ionenst\u00e4rke auf die spektrophotometrische Bestimmung der Nukleins\u00e4urereinheit. BioTechniken<\/em> 1997; 22:474\u2013481.<\/p>\n\n

Quelle<\/a><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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