{"id":68978,"date":"2022-02-21T12:51:25","date_gmt":"2022-02-21T04:51:25","guid":{"rendered":"https:\/\/qvarz.com\/absorbansmaalinger-den-hurtige-maade-at-bestemme-proevekoncentrationen-paa-2\/"},"modified":"2022-02-21T12:53:07","modified_gmt":"2022-02-21T04:53:07","slug":"absorbansmaalinger-den-hurtige-maade-at-bestemme-proevekoncentrationen-paa-2","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/qvarz.com\/da\/absorbansmaalinger-den-hurtige-maade-at-bestemme-proevekoncentrationen-paa-2\/","title":{"rendered":"Absorbansm\u00e5linger \u2013 den hurtige m\u00e5de at bestemme pr\u00f8vekoncentrationen p\u00e5"},"content":{"rendered":"\n

Inden for molekyl\u00e6re og biokemiske anvendelser, s\u00e5vel som inden for medicinsk diagnostik, er bestemmelse af koncentrationerne af stoffer i opl\u00f8sning et afg\u00f8rende analysetrin. Ofte anvendes fotometriske metoder til dette form\u00e5l, da disse kan udf\u00f8res nemt og hurtigt, og fordi de ofte repr\u00e6senterer den mest omkostningseffektive l\u00f8sning.<\/p>\n\n

Generelt er (spektro)fotometriske metoder baseret p\u00e5 princippet om, at molekyler i opl\u00f8sning absorberer lys, og at det dermed sv\u00e6kkede lys m\u00e5les ved hj\u00e6lp af en detektor. Som antydet i navnet bruger UV\/Vis-spektrofotometre synligt og ultraviolet lys i b\u00f8lgel\u00e6ngdeomr\u00e5det mellem ca. 200 og 900 nm.<\/p>\n\n

For at bestemme koncentrationen af en analyt anvendes oftest den b\u00f8lgel\u00e6ngde, hvor molekylet udviser den h\u00f8jeste absorbans (peak-b\u00f8lgel\u00e6ngde). I tilf\u00e6lde af nukleinsyrer og proteiner vil dette for eksempel v\u00e6re henholdsvis 260 nm og 280 nm. Fysikkens love beskrevet af Lambert-Beer-loven danner grundlag for beregningen af koncentrationen af et stof ud fra fotometriske m\u00e5linger. Dette sker i henhold til trinene i formlerne nedenfor:<\/p>\n\n

  1. Transmission eller transmission (T) = I\/I 0<\/sub>Transmissionen bestemmes i et fotometer ved at bruge forholdet mellem det lys, der kommer ud, og det lys, der kommer ind i pr\u00f8ven.<\/li>
  2. Absorbans (A) = log (I 0<\/sub> \/I)Absorbans beregnes ud fra den negative dekadiske logaritme for transmission.<\/li>
  3. Absorbans (A) = C x L x \u0190 => Koncentration (C) = A\/(L x \u0190)Lambert-Beer-loven beskriver absorbansens afh\u00e6ngighed af koncentrationen af pr\u00f8ven (C), den optiske vejl\u00e6ngde (L) samt afh\u00e6ngigheden af en pr\u00f8vespecifik ekstinktionskoefficient (\u0190), som vedr\u00f8rer et specifikt stof ved en bestemt b\u00f8lgel\u00e6ngde. Pr\u00f8vekoncentrationen beregnes derefter ved at konvertere formlen.<\/li><\/ol>\n

    Disse tre udsagn er beskrevet mere detaljeret nedenfor.Bestemmelse af transmission (T = I\/I 0<\/sub> )<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    Figur 1: Forenklet samling af et fotometer, der afbilder pr\u00f8ven og parametre, der er relevante for Lambert-Beers lov<\/p>\n\n

    I 0<\/sub> : Lys, der kommer ind i pr\u00f8venI: Lys, der forlader pr\u00f8venC: Koncentration af pr\u00f8venL: Pr\u00f8vens lysbane\/tykkelse\u0190: Ekstinktionskoefficient<\/em><\/p>\n\n

    Grundl\u00e6ggende best\u00e5r et fotometer af en lyskilde, en position som holder pr\u00f8ven og en detektor (figur 1). Detektoren m\u00e5ler intensiteten af lyset, der bev\u00e6ger sig gennem pr\u00f8ven. Naturligvis er en r\u00e6kke andre komponenter til stede; specifikt optiske elementer, som bryder lyset og adskiller det i individuelle b\u00f8lgel\u00e6ngder samt elementer, der reflekterer eller transmitterer lyset.<\/p>\n\n

    Lyskilden i et fotometer udsender lys med en defineret intensitet I 0<\/sub> , som ledes gennem pr\u00f8veopl\u00f8sningen. En del af lyset vil blive absorberet af pr\u00f8ven. Den del, der passerer pr\u00f8ven, registreres af detektoren som intensitet I. Forholdet I\/I 0<\/sub> beskriver transmissionen af pr\u00f8ven ved en defineret b\u00f8lgel\u00e6ngde.<\/p>\n\n

    Beregning af absorbans (A = log (I 0<\/sub> \/I)<\/strong><\/p>\n\n

    Moderne fotometre konverterer automatisk transmissionen af en pr\u00f8ve til absorbans, som er defineret som den negative dekadiske logaritme for transmission. Sp\u00f8rgsm\u00e5let opst\u00e5r, hvorfor transmission ikke direkte bruges til beregning af pr\u00f8vekoncentration. Figur 2 tydeligg\u00f8r sammenh\u00e6ngen mellem transmission og absorbans. Hvis flere pr\u00f8ver, som hver tillader 50 % af det lys, der kommer ind i pr\u00f8ven at passere, er forbundet i serie, vil den eksponentielt faldende transmissionskurve, som er afbildet nedenfor, resultere. Hvis v\u00e6rdierne i stedet udtrykkes p\u00e5 en logaritmisk m\u00e5de, vil en line\u00e6r afh\u00e6ngighed resultere. P\u00e5 denne m\u00e5de er absorbans proportional med koncentration (samt vejl\u00e6ngde), hvilket forenkler beregningerne betydeligt.<\/p>\n\n

    Figur 2: Forbindelsen mellem transmission og absorbans af lys:<\/strong><\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    a) Forbinde pr\u00f8ver i serie, som hver tillader transmission af 50 % af det lys, der kommer ind i pr\u00f8ven. Procentdelen vedr\u00f8rer den oprindelige lysintensitet.<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    b) Eksponentielt faldende transmissionskurve<\/p>\n\n

    \"\"<\/a><\/figure><\/div>\n\n

    c) Grafisk repr\u00e6sentation af absorbansen (ved anvendelse af den dekadiske logaritme for transmission)<\/p>\n\n

    Beregning af koncentration (C = A\/(L x \u0190))<\/u><\/strong>For at udlede koncentrationen af en pr\u00f8ve ud fra dens absorbans kr\u00e6ves yderligere information. Lambert-Beer-loven, som danner det fysiske grundlag for fotometriske anvendelser, beskriver, at en pr\u00f8ves absorption af lys er direkte proportional med dens koncentration og dens vejl\u00e6ngde. I alt bidrager tre parametre til absorbansv\u00e6rdien af en pr\u00f8ve: for det f\u00f8rste koncentrationen (C) af molekylet; for det andet pr\u00f8vens vejl\u00e6ngde (L), som generelt er lig med kuvettens vejl\u00e6ngde. S\u00e5 er der ekstinktionskoefficienten (\u0190). Ekstinktionskoefficienten er en fysisk konstant, der er unik for molekylet; den beskriver dens egenskab ved at absorbere lys ved en bestemt b\u00f8lgel\u00e6ngde. Denne materialespecifikke konstant er kendt for en r\u00e6kke stoffer, herunder nukleinsyrer og forskellige proteiner, og v\u00e6rdierne er publiceret i den relevante litteratur. I disse tilf\u00e6lde kan koncentrationen bestemmes \u00f8jeblikkeligt. Hvis v\u00e6rdien ikke kendes, er det dog muligt at f\u00e5 hj\u00e6lp af en kalibreringskurve. For at skabe en kalibreringskurve kr\u00e6ves standarder, dvs. opl\u00f8sninger, som indeholder kendte koncentrationer af de stoffer, der skal analyseres. Disse m\u00e5les i fotometeret f\u00f8r den faktiske pr\u00f8ve. Koncentrationen af analytten beregnes derefter ved hj\u00e6lp af standardkurven.<\/p>\n\n

    Ud over kvantificering kan absorbansm\u00e5linger ogs\u00e5 afsl\u00f8re kvalitativ information om pr\u00f8ven: for eksempel kan renheden af nukleinsyrer og proteiner bestemmes ved at uds\u00e6tte pr\u00f8ven for m\u00e5linger ved yderligere b\u00f8lgel\u00e6ngder, hvorimod information om enzymaktivitet generelt opn\u00e5s gennem gentagne m\u00e5linger over tid.<\/p>\n\n

    Kilde<\/a><\/p>\n\n

    <\/p>\n\n

    <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

    Inden for molekyl\u00e6re og biokemiske anvendelser, s\u00e5vel som inden for medicinsk diagnostik, er bestemmelse af koncentrationerne af stoffer i opl\u00f8sning et afg\u00f8rende analysetrin. Ofte anvendes fotometriske metoder til dette form\u00e5l, da disse kan udf\u00f8res nemt og hurtigt, og fordi de ofte repr\u00e6senterer den mest omkostningseffektive l\u00f8sning. Generelt er (spektro)fotometriske metoder baseret p\u00e5 princippet om, at<\/p>\n

    Read More<\/a><\/div>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_uag_custom_page_level_css":"","ub_ctt_via":"","footnotes":""},"categories":[810,836],"tags":[],"class_list":["post-68978","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-alle-indlaeg","category-spektrofotometri-da"],"featured_image_src":null,"author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/da\/author\/admin\/"},"uagb_featured_image_src":{"full":false,"thumbnail":false,"medium":false,"medium_large":false,"large":false,"1536x1536":false,"2048x2048":false,"bacola-woo-product":false,"woocommerce_thumbnail":false,"woocommerce_single":false,"woocommerce_gallery_thumbnail":false,"variation_swatches_image_size":false,"variation_swatches_tooltip_size":false,"dgwt-wcas-product-suggestion":false},"uagb_author_info":{"display_name":"admin","author_link":"https:\/\/qvarz.com\/da\/author\/admin\/"},"uagb_comment_info":0,"uagb_excerpt":"Inden for molekyl\u00e6re og biokemiske anvendelser, s\u00e5vel som inden for medicinsk diagnostik, er bestemmelse af koncentrationerne af stoffer i opl\u00f8sning et afg\u00f8rende analysetrin. Ofte anvendes fotometriske metoder til dette form\u00e5l, da disse kan udf\u00f8res nemt og hurtigt, og fordi de ofte repr\u00e6senterer den mest omkostningseffektive l\u00f8sning. Generelt er (spektro)fotometriske metoder baseret p\u00e5 princippet om, atRead…","_links":{"self":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68978","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=68978"}],"version-history":[{"count":1,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68978\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":68984,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/68978\/revisions\/68984"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=68978"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=68978"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/qvarz.com\/da\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=68978"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}